人源血红蛋白β亚基对RIG-Ⅰ/MDA5介导的抗病毒应答的调控机制的研究

论文摘要

血红蛋白是机体内重要的载氧蛋白,在抵抗病原体入侵、调控机体天然免疫中发挥着重要作用。血红蛋白β3亚基（HB）是血红蛋白的重要组分。本实验室此前研究发现,猪源HB（pHB）能通过RIG-I信号通路调节细胞I型干扰素的产生,从而拮抗猪瘟病毒在细胞内的增殖。而通过比较不同动物来源的HB与pHB之间的同源性发现,人源HB（hHB）与pHB同源性最高,因而,我们推测hHB也可能在抗病毒天然免疫反应调控中起到重要作用。在本研究中,我们明确证实hHB能通过RIG-I和MDA5介导的信号通路对不同的RNA病毒复制产生不同的调节作用。通过进一步探索其相关调节机制发现,hHB通过直接阻碍MDA5-dsRNA互作来抑制MDA5介导的抗病毒天然免疫反应。并且,hHB还能以ROS作为中介,间接地通过促进细胞内ROS累积促进RIG-I泛素化,进而增强RIG-I介导的抗病毒天然免疫反应。总之,我们的研究证明hHB是RIG-I/MDA5介导的抗病毒天然免疫反应的多效性调节因子,并揭示了细胞微环境中的氧化应激水平在抗病毒先天免疫的调节中的重要性。

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第一章绪论

1 血红蛋白β亚基免疫调节功能研究概况

1.1 HB是血红蛋白的重要组分

1.2 HB参与抗病毒反应调控

1.3 HB与Ⅰ型干扰素调节相关

2. RIG-Ⅰ/MDA5介导的抗病毒信号通路调控机制

2.1. RIG-Ⅰ介导的抗病毒天然免疫信号

2.2. MDA5介导的抗病毒天然免疫反应信号

3. 活性氧在天然免疫反应中的作用

第二章 hHB对RIG-Ⅰ/MDA5介导的抗病毒反应的调节机制的研究

1 材料方法

1.1 主要载体、细胞、毒株和试剂

1.2 hHB、RIG-I和MDA5敲除细胞的构建

1.3 双荧光素酶报告系统检测

1.4 NDV-GFP和VSV-GFP感染试验

1.5 SeV和EMCV滴度测定

1.6 NDV-GFP和VSV-GFP复制效率检测

1.7 细胞RNA提取及反转录

1.8 Real-Time RT-PCR

1.9 免疫共沉淀

1.10 Poly（I:C）结合试验

1.11 ROS检测实验

1.12 Western blot检测

1.13 统计学分析

2 结果

2.1 hHB在非红系细胞系细胞中的表达

2.2 hHB对不同RNA病毒复制的影响

2.3 hHB促进RIG-Ⅰ介导的抗病毒信号通路

2.4 hHB抑制MDA5介导的抗病毒信号通路

2.5 hHB通过RIG-Ⅰ和MDA5介导的信号通路调节RNA病毒的复制

2.6 hHB不影响RIG-Ⅰ和MDA5的表达水平

2.7 hHB抑制MDA5与dsRNA之间的互作

2.8 hHB促进RIG-Ⅰ的泛素化

2.9 hHB促进细胞内活性氧（Reactive oxygen species, ROS）的累积

2.10 hHB通过增强细胞内ROS累积促进RIG-Ⅰ介导的信号通路

2.11 人源血红蛋白α亚基（hHA）也能通过促进细胞内ROS累积增强RIG-Ⅰ介导的抗病毒信号

3 讨论

第三章结论

参考文献

致谢

作者简历

文章来源

类型: 博士论文

作者: 杨倩

导师: 仇华吉

关键词: 源血红蛋白亚基,病毒,介导的信号通路,互作,泛素化,活性氧

来源: 中国农业科学院

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院

分类号: S852.4

总页数: 65

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人源血红蛋白β亚基对RIG-Ⅰ/MDA5介导的抗病毒应答的调控机制的研究

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