羊口疮病毒对树突状细胞成熟和功能的影响及转录组学分析

羊口疮病毒对树突状细胞成熟和功能的影响及转录组学分析

论文摘要

羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染机体后能够引起强烈的免疫应答反应。为了探究ORFV对小鼠骨髓来源树突状细胞(Bone marrow-derived dendritic cells,BMDC)成熟及未成熟的CD4+T细胞(Na?ve CD4+T细胞)极化作用,并且寻找ORFV感染BMDC后与免疫相关的差异表达基因。本研究用不同感染复数(Multiplicity of infection,MOIs)的ORFV感染BMDC,检测ORFV的感染是否能够促进BMDC成熟,即通过测定其表面共刺激分子表达情况、细胞因子的分泌情况以及细胞的吞噬功能判断BMDC是否能够成熟。使用流式方法检测该细胞对Na?ve CD4+T细胞刺激能力的影响,并对1 MOI ORFV作用后的BMDC进行高通量测序。结果表明1 MOI ORFV能够促进BMDC的成熟,并且能诱导Na?ve CD4+T细胞向Th1细胞分化。高通量测序共检测到有8241个差异表达基因,其中上调基因4 205个,下调基因4036个。这些差异表达基因主要参与抗原递呈与加工过程、T细胞受体信号通路、T细胞激活与细胞因子分泌途径以及细胞凋亡信号通路中等。荧光定量逆转录-聚合酶链反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)对部分差异表达基因进行验证,结果与RNA-seq测序结果一致。本研究为进一步阐明ORFV与免疫细胞的相互作用机制奠定基础。

论文目录

  • 材料与方法
  •   1羊口疮病毒液的制备
  •   2试验动物及主要试剂
  •   3实验器材
  •   4小鼠骨髓源DCs的培养
  •   5流式细胞术(Flow cytometry)检测ORFV对小鼠DCs表型的影响
  •   6酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay;ELISA)检测DCs培养上清中细胞因子的水平
  •   7羊口疮病毒对小鼠DCs抗原吞噬能力的影响
  •   8未成熟的CD4+T细胞(Na?ve CD4+T Cell)的分离及淋巴细胞共培养
  •     8.1 Na?ve CD4+T细胞的分离
  •     8.2淋巴细胞共培养
  •   9标本的采集与处理
  •   10基因文库的构建与测序
  •   11测序数据分析
  •   12荧光定量RT-PCR验证
  •   13统计学分析
  • 结果
  •   1不同培养时间小鼠骨髓来源树突状细胞的形态特征
  •   2小鼠骨髓来源树突状细胞纯度的检测
  •   3 DCs表面分子表型的表达情况
  •   4 DCs释放细胞因子的水平
  •   5羊口疮病毒对DCs抗原吞噬功能的影响
  •   6羊口疮病毒对DCs免疫刺激能力的影响及对T细胞的诱导分化
  •   7测序过程中质检、评估和数据预处理结果
  •   8差异表达基因筛选
  •   9ORFV感染DCs后差异表达基因的GO功能分析
  •   10ORFV感染DCs后差异表达基因KEGG通路分析
  •   11荧光定量RT-PCR验证
  • 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 冯倩,吴锦艳,李玲霞,杜国玉,尚佑军,刘永生,刘湘涛

    关键词: 羊口疮,羊口疮病毒,树突状细胞,转录组,差异表达基因

    来源: 病毒学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室

    基金: 国家重点研发计划课题(项目号:2017YFD0500903),题目:羊痘羊口疮疫苗研究,国家现代肉羊产业技术体系项目(项目号:CARS-38-04B),题目:病毒病防控岗位课题

    分类号: S852.654

    DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003613

    页码: 935-947

    总页数: 13

    文件大小: 1148K

    下载量: 149

    相关论文文献

    • [1].羊口疮病的诊断及防治[J]. 今日畜牧兽医 2019(01)
    • [2].羊口疮病的诊断及防治[J]. 农家参谋 2019(10)
    • [3].羊口疮病的诊断与防治对策分析[J]. 当代畜牧 2017(17)
    • [4].羊口疮病的诊断与防治[J]. 当代畜牧 2017(23)
    • [5].羊口疮病的诊断与防治[J]. 畜牧兽医科技信息 2018(06)
    • [6].诊治山羊口疮病例[J]. 中国兽医杂志 2018(06)
    • [7].一起羊口疮病的诊断与防治[J]. 中国畜禽种业 2018(09)
    • [8].山羊口疮的治疗和预防[J]. 当代畜牧 2018(14)
    • [9].关于羊口疮病的流行与综合防治分析[J]. 农民致富之友 2019(05)
    • [10].羊口疮治疗和预防措施[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2019(08)
    • [11].羊口疮病的诊断与防治对策[J]. 中国动物保健 2018(08)
    • [12].羊口疮病毒大足株的分离鉴定[J]. 中国畜牧兽医 2019(12)
    • [13].电子显微镜技术在羊口疮病毒研究中的应用进展[J]. 贵州畜牧兽医 2018(02)
    • [14].南疆地区羊口疮的防控策略探讨[J]. 新疆畜牧业 2018(06)
    • [15].羊口疮病的流行与综合防治研究[J]. 兽医导刊 2019(13)
    • [16].羊口疮病的诊断与防治对策[J]. 中兽医学杂志 2018(02)
    • [17].羊口疮病临床症状、诊断与防治措施[J]. 畜牧兽医科学(电子版) 2019(12)
    • [18].羊口疮病毒的病原特性及诊断[J]. 畜禽业 2012(02)
    • [19].羊口疮的免疫防治研究进展[J]. 中国兽药杂志 2019(05)
    • [20].羊口疮病毒的研究进展[J]. 中国动物检疫 2008(11)
    • [21].羊口疮病毒病的临床症状与防治[J]. 养殖技术顾问 2013(09)
    • [22].羊口疮病毒环介导等温扩增高效检测方法的建立[J]. 中国兽医学报 2018(07)
    • [23].羊口疮病的流行与综合防治分析[J]. 现代畜牧科技 2018(10)
    • [24].羊口疮病毒与支原体肺炎混合感染的诊断与防治[J]. 中国兽医杂志 2020(05)
    • [25].羊口疮病毒广东大浦株的分离鉴定及其遗传进化分析[J]. 中国兽医杂志 2017(12)
    • [26].山羊口疮病毒的PCR诊断及防治[J]. 中国草食动物科学 2018(05)
    • [27].羊口疮病的临床症状和鉴别诊断与防治措施[J]. 当代畜牧 2018(32)
    • [28].羊口疮对奶山羊的危害及防治方法[J]. 中国畜禽种业 2019(10)
    • [29].羊口疮的防治措施[J]. 中兽医学杂志 2017(05)
    • [30].羊口疮病毒安徽株023基因的原核表达与生物信息学分析[J]. 浙江农业学报 2019(01)

    标签:;  ;  ;  ;  ;  

    羊口疮病毒对树突状细胞成熟和功能的影响及转录组学分析
    下载Doc文档

    猜你喜欢