鉴别H7N9流感病毒强毒和弱毒实时荧光RT-PCR方法的建立

鉴别H7N9流感病毒强毒和弱毒实时荧光RT-PCR方法的建立

论文摘要

为建立可以区分H7N9流感病毒强毒株和弱毒株的方法,通过比对Gen Bank和GISAID中H7N9流感病毒的HA基因序列以及本实验室保存的病毒序列,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H7N9流感病毒强弱毒株的实时荧光RT-PCR方法,同时对该方法的反应体系和反应参数进行优化,并开展特异性和敏感性试验以及临床应用试验。特异性试验显示,该方法具有良好的特异性,对其他常见亚型的禽流感病毒和其他禽病病毒检测均为阴性。敏感性试验显示,该方法对H7N9流感强毒和弱毒HA基因的检测下限分别为0.004 fg和0.1 fg RNA模板,高于两种商品化试剂盒的灵敏度。利用该方法对40株经实验室分离鉴定的H7N9流感病毒进行对比验证,发现检出率和符合率均为100%。结果表明,该方法具有特异、敏感、准确的优点,可用于H7N9流感病毒的快速检测,同时还可区分强弱毒株,对H7N9流感病毒,尤其是高致病性流感病毒的早期诊断和有效防控具有重要意义。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 病毒
  •   1.2 主要试剂盒
  •   1.3 引物设计
  •   1.4 单重实时荧光RT-PCR方法的建立
  •   1.5 实时荧光RT-PCR鉴别方法的建立及优化
  •   1.6 敏感性试验
  •   1.7 特异性试验
  •   1.8 与临床同类试剂盒的比较
  •   1.9 临床应用
  • 2 结果
  •   2.1 单重实时荧光RT-PCR方法的建立
  •   2.2 实时荧光RT-PCR鉴别方法的建立及优化
  •   2.3 实时荧光RT-PCR鉴别方法的特异性试验
  •   2.4 实时荧光RT-PCR鉴别方法的敏感性试验
  •   2.5 与其他试剂盒的对比
  •   2.6 临床样品检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 蒋文明,李阳,李金平,袁丽萍,侯广宇,程善菊,刘华雷

    关键词: 禽流感病毒,实时荧光,强毒株,弱毒株

    来源: 中国动物检疫 2019年04期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国动物卫生与流行病学中心国家禽流感专业实验室

    基金: 国家重点研发计划项目(2017YFC1200503)

    分类号: S852.65

    页码: 58-63

    总页数: 6

    文件大小: 1980K

    下载量: 111

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