细胞自噬对BVDV分泌的影响

论文摘要

牛病毒性腹泻（粘膜病）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine Viral Diarrhea Virus,BVDV）引起的传染病。BVDV可以感染各个年龄段的牛,其中幼龄牛感染BVDV的风险最高。该病毒存在于感染牛的尿液、粪便、精液、血液和内脏器官中,可通过多种途径进行传播,已对全球养牛业的经济发展造成了巨大的损失。自噬是一种细胞降解和物质循环的过程,在全部真核生物中都是高度保守的。在哺乳动物细胞中,有三种主要类型的自噬:微自噬,巨自噬和分子伴侣介导的自噬（CMA）。在巨自噬中,会形成一种双膜囊泡,可将细胞内需要降解和运输的物质包裹起来,我们把这种双膜囊泡称为自噬体。晚期内体,又称多囊泡体（muLtivesicuLar bodies,MVBs）,其中含有大量直径为40-100nm的小囊泡,当晚期内体与细胞膜融合后,可以将这种小囊泡释放到胞外,我们把释放到胞外的小囊泡体称为外泌体。自噬体可与晚期内体融合形成中间自噬囊泡,也可与溶酶体融合形成自噬溶酶体;当中间自噬囊泡与细胞膜融合后,可将外泌体中包裹的物质释放到细胞外。在本课题中,主要研究了BVDV的分泌与自噬过程之间的相互联系。经研究发现,病毒的分泌过程与自噬途径呈现一定程度的相关性,BVDV可利用自噬途径促进病毒粒子向胞外分泌。当自噬途径被自噬抑制剂3-MA、WM和CQ阻断时,可观察到自噬流强度减弱,经病毒毒价测定和Q-PCR检测发现,当细胞自噬被抑制时,细胞中总病毒毒价和病毒基因拷贝数无明显变化,而上清液中病毒毒价和病毒基因拷贝数明显降低,由此可以得出病毒向细胞外的分泌量出现了一定程度的减少。Beclin1是一种自噬相关基因,通过构建Beclin1稳定下调细胞系,可以稳定降低细胞的自噬流强度,细胞系感染BVDV后也出现了类似的结果,细胞中总病毒毒价和病毒基因拷贝数无明显变化,而上清液中病毒毒价和病毒基因拷贝数明显降低,所以病毒向细胞外的分泌量出现了一定程度的减少。在确定了BVDV分泌与自噬过程具有相关性后,进一步探索具体的相关通路。通过研究发现,自噬体-晚期内体通路与病毒的分泌具有一定的相关性。EPG5是自噬体-晚期内体通路中的关键基因,通过构建EPG5稳定下调细胞系,可观察到自噬体与溶酶体的融合率显著降低,感染BVDV后经病毒毒价测定和Q-PCR检测发现,细胞中总病毒毒价和病毒基因拷贝数无明显变化,而上清液中病毒毒价和病毒基因拷贝数明显降低,推断病毒向细胞外分泌的量出现了一定程度的减少,说明BVDV的分泌与自噬体-晚期内体途经相关。总之,我们的研究表明BVDV在MDBK细胞中可能不利用细胞自噬完成其复制,而利用自噬完成其向细胞外的分泌。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 艾桂青

导师: 何成强

关键词: 牛病毒性腹泻,牛病毒性腹泻病毒,自噬,晚期内体

来源: 山东师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东师范大学

基金: 国家重点研发计划,牛羊重要疫病诊断与检测新技术研究(2016YFD0500900),山东省重点研发计划(2017GNC10125)

分类号: S852.65

总页数: 67

文件大小: 3071K

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