一个硫化叶菌病毒启动子的分离与鉴定

一个硫化叶菌病毒启动子的分离与鉴定

论文摘要

几乎所有古菌病毒基因组中无RNA聚合酶(RNA polymerase,RNAP)等组成基本转录装置的同源蛋白编码序列,而且启动子活性对病毒感染过程中病毒基因的转录上可能具有重要的影响.为进一步揭示古菌病毒基因启动子的序列结构特点和活性之间的关系,首先基于硫化叶菌质粒pSeSD,将β-半乳糖苷酶编码基因lacS克隆到阿拉伯糖启动子araS下游多克隆位点,构建重组表达载体pSeSD-lacS.将pSeSD-lacS转化冰岛硫化叶菌(Sulfolobus islandicus)E233S菌株后的功能分析结果表明,lacS基因成功表达.在此基础上,利用硫化叶菌病毒STSV2衣壳蛋白编码基因ORF37上游500bp的潜在启动子片段P37替换pSeSD-lacS中的araS启动子,构建出新的重组表达质粒pSeSD-P37-lacS,进一步将pSeSD-P37-lacS转化E233S菌株进行启动子活性分析.β-半乳糖苷酶酶活结果显示,诱导后araS启动子酶活为14 345.7±422.3 mU,P37酶活为13 723.1±370.9 mU,表明P37片段具有启动子功能,而且活性与araS启动子相当.序列分析也显示,P37具有与硫化叶菌基因启动子类似的基础序列元件initiator、TATA-box及BRE等.本研究表明pSeSD-lacS可作为一个硫化叶菌病毒基因启动子筛选载体,而且高活性的基因启动子可能在STSV2病毒生命过程具有重要的作用.(图4表1参27)

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株和质粒
  •   1.2 试剂
  •   1.3 重组表达质粒p SeSD-lacS的构建
  •   1.4 重组表达质粒p SeSD-P37-lacS的构建
  •   1.5 P37启动子活性分析
  •     1.5.1 硫化叶菌尿嘧啶缺陷型菌株E233S感受态制作
  •     1.5.2 E233S电转化
  •     1.5.3 转化子X-gal显色实验
  •   1.6 启动子活力实验
  •   1.7 P37启动子结构分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 重组表达质粒p Se SD-lac S和重组表达质粒p SeSD-P37-lacS的构建
  •   2.2 P37启动子活性
  •   2.3 启动子活力
  •   2.4 启动子P37序列结构
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 何强,杨昭杰,季秀玲,魏云林,林连兵,张琦

    关键词: 病毒,启动子筛选质粒,启动子,启动子活性,核心启动序列元件子序列

    来源: 应用与环境生物学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学

    单位: 昆明理工大学生物工程技术研究中心

    基金: 国家自然科学基金项目(31260034,31660454),云南省应用基础研究基金资助项目(K KSA201126005),教育部回国人员科研启动基金(KKQA201226003)资助~~

    分类号: Q933

    DOI: 10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.06015

    页码: 399-404

    总页数: 6

    文件大小: 1671K

    下载量: 68

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