适用于双向电泳分析的链格孢菌体蛋白提取方法的筛选

适用于双向电泳分析的链格孢菌体蛋白提取方法的筛选

论文摘要

为筛选出一套适用于双向电泳分析的链格孢菌蛋白的提取方法,以该菌为研究材料,首先采用TCA-丙酮法、磷酸-TCA-丙酮法、SDS提取法和TCA/丙酮-SDS/酚抽提法分别提取菌丝蛋白质,然后进行蛋白质浓度的测定和单向SDS-PAGE试验,并建立双向电泳体系。结果表明:TCA/丙酮-SDS/酚抽提法所获得的蛋白质浓度为15.9 mg/mL,分别是其他三种方法所得蛋白浓度的2.64、4.61和1.43倍;SDS-PAGE图谱中形成的条带数目最多、丰度最好;所获得的2-DE图谱背景清晰干净,无明显的横纵条纹,分辨率高,可辨别的蛋白质点数为1 138个,是TCA-丙酮法所分离蛋白点数的1.89倍。由此可知,TCA/丙酮-SDS/酚抽提法为链格孢菌蛋白提取的最优方法,该方法所提取的蛋白质适用于双向电泳分析及后续的蛋白质组学研究。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌种
  •     1.1.2 主要试剂和仪器
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 病原菌培养与收集
  •     1.2.2 菌体蛋白的提取
  •     1.2.3 蛋白质溶解
  •     1.2.4 蛋白质定量
  •     1.2.5 SDS-PAGE分析
  •     1.2.6 双向电泳分析
  •     1.2.7 凝胶染色与图像处理
  •     1.2.8 数据处理与分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 蛋白质提取效果的比较
  •   2.2 SDS-PAGE电泳效果分析
  •   2.3 两种方法提取蛋白的双向电泳比较
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李贞彪,王军节,王鹏

    关键词: 链格孢,采后病害,蛋白质提取,双向电泳,丙酮,酚抽提法

    来源: 植物保护 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

    单位: 北方民族大学生物科学与工程学院植物性农产品贮藏与加工重点实验室

    基金: 宁夏自然科学基金(NZ16087),北方民族大学重点科研项目(2015KJ35)

    分类号: S432.44

    DOI: 10.16688/j.zwbh.2018285

    页码: 138-144

    总页数: 7

    文件大小: 742K

    下载量: 152

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