鸭乙型肝炎病毒环介导等温扩增检测系统的建立及其基因组序列分析

论文摘要

鸭乙型肝炎病毒与人乙肝病毒同属嗜肝DNA病毒科,它们在病毒的结构、病毒的复制过程、感染宿主机制和致病机制等方面比较类似,因而以鸭乙型肝炎病毒为动物感染模型对研究嗜肝病毒的复制周期并抑制病毒复制大有助益,DHBV体外感染原代鸭肝细胞模型和体内感染动物模型还可用来研究病毒基因的作用以及筛选治疗药物。本研究通过建立一种新型的环介导等温扩增检测系统,利用其特异性强、灵敏度高、快速简便的特点,优化构建出一套即能简化操作流程,又能满足快速检测需要的适用于基层单位及实地现场检测的检测系统。并通过不断地优化LAMP体系各组分配比和反应条件,建立一个最佳的能够特异检测鸭乙型肝炎病毒的LAMP反应体系,使鸭乙型肝炎病毒可以在基层环境大规模大批量被检测出来。经过大量的实验,得到了鸭乙型肝炎LAMP检测系统的最优化条件为:1.酚红和甲酚红混合染色液作为显色试剂,阳性结果显示为亮黄色,阴性结果显示为紫红色。颜色差别大,利于观察判定结果;2.通过设置梯度实验选择最佳Mg离子浓度,发现体系中Mg离子浓度为6mM时,扩增效果最好;3.通过调节dNTPs浓度发现,当dNTPs浓度为1.2 mM时,扩增效果最好;4.对LAMP体系进行时间梯度实验时,可观察到反应时间为50 min的电泳图条带最为明亮,扩增效果最好,因此选择反应50 min为最佳反应时间;5.进行LAMP温度梯度实验时,发现反应温度为63℃、64℃、65℃时,电泳胶图泳带都较为明亮,扩增效果较好,最后选择Bst DNA聚合酶的最佳酶活温度65℃作为反应的最优温度。利用优化好的LAPM检测系统批量检测河南南阳、安徽亳州、湖北潜江三地鸭场采集的鸭血清样本,筛选出携带DHBV病毒的阳性样本。结果显示,河南南阳、安徽亳州、湖北潜江三地的鸭乙型肝炎感染率分别为17.6%、13.6%、16.1%,差异统计学不显著(P>0.05)。从三地的DHBV阳性样本中各挑选1份进行DHBV全基因的克隆、测序和序列分析,河南南阳、安徽亳州、湖北潜江3株DHBV分离株基因组全长分别为3024、3027、3024 bp。序列分析数据显示3株DHBV间核苷酸同源性为95.1%~97.4%,与选取的25株参考株同源性为90.3%~96.2%。遗传进化树和P蛋白氨基酸关键位点分析证明,河南南阳、安徽亳州2株分离株为类中方基因型,湖北潜江分离株不属于中方型和西方型两大分支,属于独立小分支,可能产生了病毒重组。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王静

导师: 阚云超,冀君,李健

关键词: 鸭乙型肝炎病毒,环介导等温扩增,基因组,序列分析

来源: 南阳师范学院

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技,医药卫生科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学,基础医学

单位: 南阳师范学院

分类号: S852.65;R373

总页数: 68

文件大小: 2746K

下载量: 57

相关论文文献

• [1].电化学发光免疫分析技术在乙型肝炎病毒临床检验中的应用效果[J]. 心理月刊 2019(13)
• [2].拉米夫定治疗乙型肝炎病毒引起失代偿肝病临床分析[J]. 大家健康(学术版) 2015(06)
• [3].不同乙肝治疗方法对抗结核治疗中的肝功保护作用[J]. 健康之路 2016(09)
• [4].帮您了解乙型肝炎病毒母婴传播阻断[J]. 健康向导 2012(06)
• [5].乙型肝炎病毒再激活与T细胞亚群的相关性研究[J]. 中国医学创新 2011(26)
• [6].英国警示达雷妥尤单抗的乙型肝炎病毒再激活风险[J]. 中国药物评价 2019(06)
• [7].乙型肝炎病毒阳性供肝的规范化临床应用[J]. 实用器官移植电子杂志 2020(02)
• [8].免疫人群乙型肝炎病毒抗体阳性率调查及乙肝核心抗体检测方法研究[J]. 中国卫生检验杂志 2019(10)
• [9].结核菌和乙型肝炎病毒合并感染带来的四个临床矛盾[J]. 肝脏 2016(11)
• [10].HBeAg阳性及HBeAg阴性乙型肝炎病毒相关原发性肝癌患者生物化学指标及病毒载量[J]. 中国肝脏病杂志(电子版) 2016(04)
• [11].免疫抑制剂治疗过程中乙型肝炎病毒再激活的预后因素分析及研究进展[J]. 肝脏 2017(01)
• [12].乙型肝炎病毒体外培养细胞模型研究进展[J]. 肝脏 2017(09)
• [13].母婴乙型肝炎病毒五项定量检测结果分析[J]. 中国现代医生 2016(02)
• [14].免疫抑制剂致乙型肝炎病毒再激活病历报告及文献复习[J]. 中国现代药物应用 2015(11)
• [15].乙型肝炎病毒自然变异位点研究进展[J]. 继续医学教育 2015(07)
• [16].乙型肝炎病毒的母婴传播和预防[J]. 家庭生活指南 2019(11)
• [17].siRNA对乙型肝炎病毒抵抗的研究进展[J]. 中国医药指南 2012(02)
• [18].胸腺肽α1预防乙型肝炎病毒再激活临床研究[J]. 中国当代医药 2012(07)
• [19].乙型肝炎病毒X蛋白在肝细胞癌发生发展中的作用[J]. 医学综述 2012(11)
• [20].乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测的临床应用[J]. 中国医药指南 2010(22)
• [21].HIV感染献血者中乙型肝炎病毒的感染特征研究[J]. 中国输血杂志 2010(S1)
• [22].乙型肝炎病毒大蛋白检测的临床意义及应用价值[J]. 中国卫生检验杂志 2010(12)
• [23].乙型肝炎病毒职业暴露35例调查[J]. 中国医学创新 2010(17)
• [24].乙型肝炎病毒C蛋白和X蛋白的修饰及其意义[J]. 生物技术通报 2009(06)
• [25].鸭乙型肝炎病毒C区结构模型的研究进展[J]. 长江大学学报(自科版)医学卷 2009(02)
• [26].乙型肝炎病毒HBeAg假阳性原因分析[J]. 西南国防医药 2009(12)
• [27].乙型肝炎病毒的生态学研究进展[J]. 华西医学 2008(03)
• [28].乙型肝炎病毒X蛋白对血管内皮生长因子的调节通路研究[J]. 华中科技大学学报(医学版) 2008(05)
• [29].乙型肝炎病毒与临床[J]. 铜仁职业技术学院学报 2012(02)
• [30].血液透析患者对重组乙型肝炎病毒疫苗的应答相关因素分析[J]. 中国社区医师 2020(14)

标签：鸭乙型肝炎病毒论文;  环介导等温扩增论文;  基因组论文;  序列分析论文;