导读:本文包含了植物表达载体构建论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:载体,蛋白,从江,植物,紫花苜蓿,半胱氨酸,激酶。
植物表达载体构建论文文献综述
王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲[1]（2019）在《HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得》一文中研究指出为研究水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因在非生物胁迫中的生物学功能,根据OsPIP2;7基因序列设计特异性引物,以水稻品种中花11的叁叶龄叶片RNA反转录的cDNA第一链为模板,克隆OsPIP2;7。采用嵌套PCR的方法,将3×HA标签的碱基序列连接在去除终止子OsPIP2;7基因序列的3′端,然后将此核酸片段插入到植物双元表达载体pHB中,构建pHB-OsPIP2;7-3×HA载体。以中花11成熟胚愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,经过在含有潮霉素的培养基上筛选和分化,获得阳性转化子。提取转基因植株的DNA,进行潮霉素阳性植株的筛选。将阳性植株进行RNA表达检测,获得OsPIP2;7基因表达量上升的转基因阳性植株。为了检测转基因植株中OsPIP2;7蛋白的表达情况,提取OsPIP2;7基因表达上升的转基因植株膜蛋白后,用HA抗体进行杂交的Western-blot检测结果显示,OsPIP2;7-HA蛋白在转基因阳性植株体内过量表达。获得的过表达OsPIP2;7转基因新材料,将为研究OsPIP2;7基因的生物学新功能提供试验基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2019年05期）
左登攀,陈相儒,赵添羽,张永亮,王颖[2]（2019）在《N端融合检测标签的pMDC32植物表达载体系列的构建》一文中研究指出Gateway植物表达载体pMDC32主要组成元件包括启动子、Gateway盒(attR1-ccdB-attR2)、终止子和用于选择转基因植物的筛选标记基因。所用的启动子是组成型启动子为烟草花叶病毒(CaMV)双增强启动子(2×CaMV 35S)。本实验室已在表达载体pMDC32attR2区C端插入3*Flag序列的pMDC32-MCS-3*flag载体,为了便于实验中目的基因N端融合检测标签,本文在以pMDC32为骨架基础上进一步构建了可在目的蛋白N端带有3*Flag、3*HA和3*Flag-3*HA检测标签的系列表达载体,分别命名为pMDC32-3*Flag-MCS、pMDC32-3*HA-MCS和pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,3种载体构建策略分别如下。首先合成了3*Flag-3*HA基因并连在pUC57-simple-225载体上,通过KpnⅠ/Sa/Ⅰ双酶切获得3*Flag-3*HA (KpnⅠ/SalⅠ)片段,插入已用KpnⅠ/SalⅠ双酶切获得pMDC32 (KpnⅠ/SalⅠ)线性化载体中,获得重组载体pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindIII/SalⅠ酶切位点,3′端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacI)。pMDC32-3*Flag-MCS构建首先基于携带3*Flag-3×HA基因的pUC57-simple-225载体PCR扩增3*Flag(KpnⅠ/SpeI)片段,再将3*Flag(KpnⅠ/SpeⅠ)片段插入已用KpnⅠ/SpeⅠ双酶切获得的pMDC32 (KpnⅠ/SpeⅠ)线性化载体中,获得pMDC32-3*Flag-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端使用SPeI酶切位点,3′端使用SacⅠ)。pMDC32-3*HA-MCS构建以pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS载体以BamHI/BglⅡ进行双酶切后回收pMDC32-3*HA的载体,自连接获得pMDC32-3*HA-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindⅢ/SalⅠ酶切位点,3'端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacⅠ)。本实验对Gateway表达载体pMDC32改造后获得N端带有检测标签的载体,均能够在植物中进行瞬时表达目的基因及进行转基因遗传转化,并获得很好的表达效果,为重要基因功能研究及植物遗传转化获得转基因遗传材料提供了便利。(本文来源于《中国植物病理学会2019年学术年会论文集》期刊2019-07-20）
张超,付叁雄,周小婴,唐容,黄莎[3]（2019）在《甘蓝型油菜GPDH基因克隆、表达分析及植物过表达载体构建》一文中研究指出【目的】克隆甘蓝型油菜的甘油-3-磷酸脱氢酶(GPDH)基因(BnGPDH),分析其表达特性并构建植物过表达载体,为研究该基因在油菜种子叁酰甘油(TAG)合成和积累中的作用机制提供理论参考。【方法】以甘蓝型油菜H105为材料,采用同源克隆技术克隆与At3G07690同源的BnGPDH基因,对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BnGPDH基因在甘蓝型油菜不同组织[根、茎、叶、蕾、花及花后(DAF)7、14、21、30和40 d角果皮和种子]及高、低油含量自交系角果皮和种子中的表达情况,并将克隆获得的BnGPDH基因连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上构建植物过表达载体。【结果】克隆获得的BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因编码区(CDS)长度均为1338 bp,编码445个氨基酸,其编码蛋白仅有5个氨基酸差异,均具有NAD_Gly3P_dh_N和NAD_Gly3P_dh_C结构域,定位于细胞质,分别与白菜细胞质型GPDH蛋白(XP_009147040.1)和甘蓝细胞质型GPDH蛋白(XP_013585317.1)的氨基酸序列具有较高相似度,对应的相似度为100.00%和99.78%,且二者与双子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较近,与单子叶植物GPDH蛋白亲缘关系较远。BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同组织中均有表达,且表达模式总体上相似,在21DAF和30DAF种子中的表达量显着高于其他组织部位(P<0.05,下同),表明21DAF和30DAF是油菜种子TAG合成和积累的高峰期,但在角果生长发育不同时期这2个基因的表达略有不同,且在茎、蕾、种子(7DAF、21DAF、30DAF和40DAF)和角果皮(7DAF和40DAF)中,BnGPDHc2-1基因的表达量均显着高于BnGPDHc2-2基因,而在14DAF角果皮中BnGPDHc2-2基因的表达量显着高于BnGPDHc2-1基因。21DAF种子中BnGPDHc2-1基因在3个高油含量自交系中的表达量显着高于3个低油含量自交系,BnGPDHc2-2基因在高油含量自交系IL130和IL594中的表达量显着高于3个低油含量自交系;在30DAF种子中,BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2在3个高油含量自交系中的表达量均显着高于3个低油含量自交系。将BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因分别连接至携带napin启动子的pCAMBIA1390-NAPIN载体上可成功构建获得植物过表达载体。【结论】BnGPDHc2-1和BnGPDHc2-2基因在甘蓝型油菜不同发育期角果中行使的功能存在一定分化,在进化过程中可能分别来源于白菜基因组和甘蓝基因组,但均在甘蓝型油菜种子TAG合成和积累发挥重要调控作用。因此,构建的植物过表达载体可用于BnGPDH基因功能分析及油菜种子油含量基因工程改良研究。(本文来源于《南方农业学报》期刊2019年07期）
田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红[4]（2019）在《从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达》一文中研究指出为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ蛋白抗病毒活性。结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ基因序列并构建了从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白含量为169.397、170.657、170.37pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ经4-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。本实验成功构建从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ药用植物蛋白的研究开发提供参考依据。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2019年07期）
王芳,李伟,王舰[5]（2019）在《马铃薯DREB1转录因子的克隆和植物表达载体构建》一文中研究指出WRKY是DREB/CBF转录因子在植物非生物胁迫响应中起重要的调节作用、激活下游功能基因表达的一类反式作用因子,能增强植物的逆境适应性。本研究以10%的PEG6000胁迫下青薯9号茎段的cDNA为模板,根据马铃薯StDREB1 CDS序列设计特异引物,采用RT-PCR技术克隆了DREB1转录因子,并进行植物表达载体构建。结果表明,DREB1转录因子全长约783 bp,编码框为657 bp,编码218个氨基酸,蛋白质大小为27.6 kD,理论等电点为4.68。利用SWISS-MODEL在线工具和ProtScal对DREB蛋白二级结构和叁级结构进行预测及分析,结果表明,DREB1蛋白二级可能为mixed型,平均疏水性为-0.868,是亲水性蛋白,属于非跨膜蛋白、非分泌型蛋白。以2gcc.1.A为模板进行DREB1转录因子的叁级结构预测,其AP2结构域非常保守。经NCBI中氨基酸同源序列分析表明,DREB转录因子的核苷酸序列与番茄(Solanum pennellii)的氨基酸序列同源性最高达到88%。通过SacⅠ和XbaⅠ酶切,将StDREB1连接在pBI221-GFP载体上,构建了CaMV35S启动子驱动的DREB1转录因子的植物表达载体StpBI-GFP-DREB1。DREB1转录因子的克隆,为下一步从分子水平上验证其抗旱的生物学功能及提示马铃薯非生物胁迫抗逆机制提供科学依据,为提高马铃薯抗旱分子机制提供新材料。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年11期）
李思璇[6]（2019）在《败育型植物表达载体的构建及功能验证》一文中研究指出败育问题是植物界研究热点之一,在作物常规育种及生产制种方面有着广泛应用,运用败育型植物表达载体遗传转化是引发植物不育的一种快捷策略。本文分别克隆了拟南芥花分生组织及花器官特异基因AP1的启动子和大肠杆菌RNaseH基因的编码区,构建了败育型植物表达载体pHZM13-AP1-RNaseH,并通过电击法将其导入农杆菌EHA105。以烟草C151为受体材料,经农杆菌介导遗传转化,共获得转化株35株。花粉管萌发试验表明,转化株花粉同对照间萌发活力并无差别;称取种子百粒重,转化株平均为6.6mg,对照株平均为9.1mg,表明二者差别显着。进一步电镜扫描种子表面,发现转化株种皮表面褶皱状纹饰减少,成因不明。种子萌发试验表明,转化株种子发率较低,且表现萌发延迟。本研究表明,该败育型植物表达载体极度削弱了宿主植物的育性,但自杀基因并未影响花器发生,这可能同所用启动子在异源表达背景下作用活性改变有关。(本文来源于《牡丹江师范学院》期刊2019-06-13）
岳敏,宋亚楠,安茜,赵熙宁,薛金爱[7]（2019）在《猫爪草酰基-Δ9脱氢酶基因植物表达载体的构建及瞬时表达》一文中研究指出猫爪草种子能高水平积累棕榈油酸(C16∶1Δ9)和顺式-11-十八碳烯酸(C18∶1Δ11)等具有食品、医药和工业应用价值的ω-7脂肪酸(ω-7 FA)。酰基-Δ9脱氢酶(acyl-Δ9 desaturase,Δ9D)底物特异性决定着植物细胞合成单烯脂肪酸的种类。为检测来自猫爪草的酰基-ACP-Δ9脱氢酶(MucACP-Δ9D)是否可异源表达用于在其他植物合成ω-7 FA,文章构建了MucACP-Δ9D基因植物表达载体,并通过农杆菌介导在本氏烟草叶组织瞬时表达。用气相色谱(GC)检测烟叶脂肪酸成分,结果显示,野生型及空载体对照的ω-7FA总含量仅为0.4%;然而,MucACP-Δ9D瞬时表达的烟叶组织ω-7 FA总含量提高到14.2%,其中,C16∶1Δ9和C18∶1Δ11含量分别达8.8%和5.4%。研究表明,MucACP-Δ9D可在异源组织催化棕榈油酸合成,可进一步用于其他油料作物的油脂遗传改良,以富集ω-7 FA。(本文来源于《山西农业科学》期刊2019年05期）
张雅晰,李鑫,屈新月,唐志菲,魏佳兴[8]（2019）在《结缕草热激蛋白基因ZjHSP19.5植物表达载体构建及转化》一文中研究指出以结缕草(Zoysia japonica Steud)cDNA为模板,利用PCR扩增ZjHSP19.5基因,并插入到PGEM-T Easy Vector上构建成克隆载体ZjHSP19.5-T。利用限制性内切酶BamHI分别对克隆载体ZjHSP19.5-T和植物表达载体PZH01进行单酶切,得到目的基因和线性质粒。在T4DNA连接酶的作用下将两者进行定向连接,经琼脂糖凝胶电泳检测、酶切鉴定,获得植物表达载体P-ZjHSP19.5。利用农杆菌介导法将重组植物表达载体P-ZjHSP19.5转化至匍匐翦股颖,为进一步研究ZjHSP19.5的功能和培育匍匐翦股颖抗热新品系打下基础。(本文来源于《河北农业大学学报》期刊2019年03期）
付亚娟,侯荟玲,乔洁,耿晓进,王聪艳[9]（2019）在《大花杓兰钙依赖蛋白激酶基因克隆及植物表达载体构建》一文中研究指出RT-PCR结合RACE技术,克隆到1个全长2079 bp的大花杓兰钙依赖蛋白激酶基因CmCDPK,cDNA为1491 bp,编码496个氨基酸。CmCDPK是1个具有CDPKs典型的Ser/Thr蛋白激酶保守结构域、含1个跨膜结构域、无信号肽、稳定的亲水性蛋白。CmCDPK二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲构成。相对于其他植物CDPKs,CmCDPK与小兰屿蝴蝶兰和铁皮石斛的亲缘关系更近。通过DNA重组技术将CmCDPK片段克隆到pBI121质粒上。PCR、酶切及DNA测序的结果表明,重组质粒pBI-CmCDPK包含1个1491 bp的CmCDPK片段,且核苷酸序列及插入方向完全正确。本研究首次克隆了大花杓兰CmCDPK基因,并成功构建了植物过表达载体pBI-CmCDPK,为CmCDPK基因在烟草中实现遗传转化和功能研究奠定基础。(本文来源于《植物遗传资源学报》期刊2019年06期）
赵菲佚,马家琦,安建平,焦成瑾,马伟超[10]（2019）在《紫花苜蓿半胱氨酸合酶基因MsSDCS-0植物GFP荧光表达载体构建与拟南芥转化》一文中研究指出半胱氨酸合成酶[Cysteine Synthase, CSase,也称为O-乙酰丝氨酸裂解酶,O-acetylserine(thiol)lyase,OAS-TL]在植物有机硫合成中起着关键的作用。本研究从已有中间克隆载体pBSCMsSDCS-0上获取已克隆的紫花苜蓿半胱氨酸合成酶基因MsSDCS-0片段后,将其亚克隆于植物荧光表达载体pCAMBIA1205-GFPn上,成功构建了该基因成员的植物GFP表达载体pCAMBIA1205-GFPn-MsSDCS-0。pCAMBIA1205-GFPn-MsSDCS-0在野生型拟南芥(Col-0)原生质体瞬时表达确认MsSDCS-0定位于胞质中;此外,该载体对拟南芥Col-0转化表明:过表达该基因不会对植物的生长表型产生影响。本研究结果将为通过基因工程方式提高紫花苜蓿含硫氨基酸含量及该基因在植物体内功能后续研究提供基础。(本文来源于《天水师范学院学报》期刊2019年02期）
植物表达载体构建论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
Gateway植物表达载体pMDC32主要组成元件包括启动子、Gateway盒(attR1-ccdB-attR2)、终止子和用于选择转基因植物的筛选标记基因。所用的启动子是组成型启动子为烟草花叶病毒(CaMV)双增强启动子(2×CaMV 35S)。本实验室已在表达载体pMDC32attR2区C端插入3*Flag序列的pMDC32-MCS-3*flag载体,为了便于实验中目的基因N端融合检测标签,本文在以pMDC32为骨架基础上进一步构建了可在目的蛋白N端带有3*Flag、3*HA和3*Flag-3*HA检测标签的系列表达载体,分别命名为pMDC32-3*Flag-MCS、pMDC32-3*HA-MCS和pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,3种载体构建策略分别如下。首先合成了3*Flag-3*HA基因并连在pUC57-simple-225载体上,通过KpnⅠ/Sa/Ⅰ双酶切获得3*Flag-3*HA (KpnⅠ/SalⅠ)片段,插入已用KpnⅠ/SalⅠ双酶切获得pMDC32 (KpnⅠ/SalⅠ)线性化载体中,获得重组载体pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindIII/SalⅠ酶切位点,3′端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacI)。pMDC32-3*Flag-MCS构建首先基于携带3*Flag-3×HA基因的pUC57-simple-225载体PCR扩增3*Flag(KpnⅠ/SpeI)片段,再将3*Flag(KpnⅠ/SpeⅠ)片段插入已用KpnⅠ/SpeⅠ双酶切获得的pMDC32 (KpnⅠ/SpeⅠ)线性化载体中,获得pMDC32-3*Flag-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端使用SPeI酶切位点,3′端使用SacⅠ)。pMDC32-3*HA-MCS构建以pMDC32-3*Flag-3*HA-MCS载体以BamHI/BglⅡ进行双酶切后回收pMDC32-3*HA的载体,自连接获得pMDC32-3*HA-MCS重组载体,表达目的蛋白时可根据多克隆位点酶切插入基因(插入目的基因5′端可使用HindⅢ/SalⅠ酶切位点,3'端可使用PacⅠ/SpeⅠ/SacⅠ)。本实验对Gateway表达载体pMDC32改造后获得N端带有检测标签的载体,均能够在植物中进行瞬时表达目的基因及进行转基因遗传转化,并获得很好的表达效果,为重要基因功能研究及植物遗传转化获得转基因遗传材料提供了便利。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
植物表达载体构建论文参考文献
[1].王晓静,孙林静,孙玥,张融雪,李军玲.HA标签的水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因植物双元表达载体构建及转基因水稻的获得[J].华北农学报.2019
[2].左登攀,陈相儒,赵添羽,张永亮,王颖.N端融合检测标签的pMDC32植物表达载体系列的构建[C].中国植物病理学会2019年学术年会论文集.2019
[3].张超,付叁雄,周小婴,唐容,黄莎.甘蓝型油菜GPDH基因克隆、表达分析及植物过表达载体构建[J].南方农业学报.2019
[4].田浪,温贵兰,张升波,杨佰启,李昌红.从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达[J].中国畜牧杂志.2019
[5].王芳,李伟,王舰.马铃薯DREB1转录因子的克隆和植物表达载体构建[J].分子植物育种.2019
[6].李思璇.败育型植物表达载体的构建及功能验证[D].牡丹江师范学院.2019
[7].岳敏,宋亚楠,安茜,赵熙宁,薛金爱.猫爪草酰基-Δ9脱氢酶基因植物表达载体的构建及瞬时表达[J].山西农业科学.2019
[8].张雅晰,李鑫,屈新月,唐志菲,魏佳兴.结缕草热激蛋白基因ZjHSP19.5植物表达载体构建及转化[J].河北农业大学学报.2019
[9].付亚娟,侯荟玲,乔洁,耿晓进,王聪艳.大花杓兰钙依赖蛋白激酶基因克隆及植物表达载体构建[J].植物遗传资源学报.2019
[10].赵菲佚,马家琦,安建平,焦成瑾,马伟超.紫花苜蓿半胱氨酸合酶基因MsSDCS-0植物GFP荧光表达载体构建与拟南芥转化[J].天水师范学院学报.2019
论文知识图
