滑液支原体GDPD基因的原核表达、酶活性分析及亚细胞定位

论文摘要

为了解滑液支原体（Mycoplasma synoviae,MS）甘油磷酸二酯磷酸二酯酶（glycerophosphodoester phosphodiesterase,GDPD）的生物学功能,本试验参照GenBank中MS WVU1853株序列设计特异性引物,应用PCR技术扩增获得MS WVU1853株GDPD基因,在测序及序列分析的基础上将其克隆至pET-28a（+）质粒构建原核表达载体pET-GDPD,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后经IPTG诱导表达,纯化表达产物并分析其酶促活性,进而制备其多克隆抗体,应用间接ELISA和Western blotting检测其免疫原性并分析其在MS内的分布。结果表明,MS WVU1853株GDPD基因CDS全长726 bp,编码242个氨基酸,重组蛋白分子质量约为28 ku。酶促活性检测表明,重组蛋白可催化对硝基苯磷酸二钠（pNPP）转化为对硝基苯酚,且其作用的最适pH为9.0,最佳温度为37℃,Pb2+具有较强的抑制作用,而Ca2+对其具有较强的促进作用。间接ELISA及Western blotting检测结果表明,MS GDPD具有良好的免疫原性,可刺激新西兰兔产生高水平的抗体,血清效价高达1∶160 000;亚细胞定位结果表明,MS GDPD在细胞膜和细胞浆内均有分布,但在细胞膜的含量略高于细胞浆。本研究结果为探究MS GDPD生物学功能提供了一定的参考依据。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡荣斌,邢小勇,武小椿,张阳阳,贺健,张生英,包世俊

关键词: 滑液支原体,甘油磷酸二酯磷酸二酯酶,原核表达,酶活性测定,亚细胞定位

来源: 中国畜牧兽医 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 甘肃农业大学动物医学院

基金: 国家自然科学基金(31360620),甘肃省自然科学基金(1308RJZA235)

分类号: S852.62

DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.08.005

页码: 2228-2235

总页数: 8

文件大小: 925K

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