GⅡ.21型诺如病毒衣壳蛋白VP1的表达、纯化及鉴定

论文摘要

目的构建含有GⅡ.21型人诺如病毒（human norovirus,HuNoV）衣壳蛋白VP1基因的重组质粒,通过PichiaPink毕赤酵母表达VP1蛋白,并鉴定纯化产物。方法合成NoV GⅡ.21 VP1蛋白基因序列,将其连接至pPink-HC载体,构建重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1;经测序鉴定后,电转化毕赤酵母PichiaPink,甲醇诱导目的蛋白表达;采用AKTA pure M150型纯化仪纯化目的蛋白,Western blot法分析其抗原性,SEC-HPLC法检测纯化蛋白出峰时间。结果经测序鉴定,重组质粒pPink-HC-GⅡ.21-VP1构建正确;纯化的目的蛋白VP1纯度在95%以上,能与抗NoV病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）抗体发生反应;测定目的蛋白出峰时间为16. 923 min,与NoV VLP理论出峰时间一致。结论成功在毕赤酵母高表达了GⅡ.21衣壳蛋白VP1,并制备了高纯度及良好抗原性的目的蛋白,为多价重组NoV疫苗的研发及规模化生产奠定了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李攀,刘术敏,邓丹妹,吴常伟,程英杰,黄恩启

关键词: 诺如病毒,蛋白,毕赤酵母

来源: 中国生物制品学杂志 2019年10期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 安徽智飞龙科马生物制药有限公司

分类号: R373

DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002830

页码: 1087-1091

总页数: 5

文件大小: 278K

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