牛干扰素高效表达菌株的构建

论文摘要

干扰素是在干扰素诱导剂作用下诱导特定的细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤及调节免疫等作用的一类高活性、多功能糖蛋白。干扰素具有高度种属特异性,既可以抑制多种RNA病毒,又可以抑制多种DNA病毒。牛干扰素根据其作用类型分为I型干扰素和II型干扰素两种类型,其中I型干扰素主要分为α、β、ω、ε和τ五种亚型,II型干扰素主要有γ干扰素。BoIFN-α主要具有抗病毒的功能,在干扰素中,它的抗病毒能力是最强的,对动物病毒性疾病产生很好的治疗和防治作用。因此研究牛干扰素对动物病毒性疾病的防治具有重大意义。本实验成功构建了四种表达载体:（1）本实验成功克隆牛干扰素基因,并连接到pET-28a载体上,经测序,结果完全正确。（2）为提高蛋白表达量,在不改变干扰素氨基酸序列的前提下,利用大肠杆菌对密码子的偏好性,对干扰素序列进行优化,并连接到pET-28a载体上。（3）为提高蛋白表达量,在pET-28a-BoIFN-α-t上串联表达元件,经测序表达元件已成功连接到pET-28a-BoIFN-α上。（4）为提高蛋白可溶性表达,将BoIFN-α基因连接到低温表达载体表达载体pET-28a-sumo上,经测序,结果完全正确。BoIFN-α利用原核表达系统成功表达,已筛选到高表达量菌株,通过优化序列、串联表达元件、改善培养基组分、改变诱导条件等方面提高蛋白表达量。为了增加蛋白可溶性表达,选用了低温表达载体pET-28a-sumo,比较蛋白的可溶性表达。经测定,BoIFN-α最佳诱导条件为优化后序列采用LB培养基在37℃下IPTG浓度为1mmol/L,180rpm诱导4h,表达量占总蛋白的34.5%。采用低温表达载体可以增加蛋白的可溶性表达,但总的蛋白表达量也降低了。

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文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王秀华

导师: 何成强

关键词: 干扰素,蛋白,原核表达

来源: 山东师范大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 山东师范大学

分类号: Q78

总页数: 67

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标签：干扰素论文;  蛋白论文;  原核表达论文;