基于银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体SERS放大特性的应用分析

基于银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体SERS放大特性的应用分析

论文摘要

近几十年来,由于生活环境的污染和生活节奏的加快,患癌人数急剧增加。然而,对于80%以上的癌症患者,如果能做到早期发现并及时治疗,均可以得到治愈。因此,研究出对肿瘤的早期检测和诊断技术具有十分重要的意义。MicroRNA(miRNA)失调对于疾病发展与病程进展的重要性以及外周血中稳定的miRNA的发现使得这些短序列核酸成为下一代疾病诊断、治疗以及预后的生物标志物。与此同时,一些高灵敏、安全、高特异性的miRNA肿瘤标志物检测技术相继被开发出来。其中,以表面增强拉曼散射(Surface-Enhanced Raman Scattering,SERS)技术为基础开发出的miRNA肿瘤标志物检测方案由于其具有高检测灵敏度、良好的特异性和宽广的检测范围而日益受到研究者的关注。目前,如何进一步提高灵敏度在SERS标记检测研究中仍是主要热点之一。因此,设计一种新的提高灵敏度的SERS标记检测方案对SERS技术在肿瘤的早期检测和诊断具有重要意义。本论文的工作,主要根据生物素-链霉亲和素(Biotin-Streptavidin,B-S)系统的生物特性,将B-S系统嫁接在SERS三明治结构之上,实现了SERS信号的级联放大,对与小细胞肺癌相关的特异性肿瘤标志物miRNA-21以及与肾癌相关的mir-106a进行了高灵敏检测。主要内容归结如下:1、基于银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体SERS放大特性的miRNA-21检测分析首先,采用电子束物理气相沉积(EBPVD)技术在硅片表面沉积一层100 nm厚的银膜,之后再将捕获DNA固定在上面作为基底。其次,通过将制备的链接有4-巯基苯甲酸(4MBA)分子的银纳米粒子与修饰有氨基和生物素的探针DNA链接,制备了Ag@4MBA@DNA-biotin探针。然后,通过杂交链式反应构建基底-靶分子-探针的三明治结构进行拉曼检测。最后,通过向形成的三明治结构中循环加入链霉亲和素和探针,形成探针聚集体,实现对检测信号的放大,从而进一步提高检测灵敏度。实验结果表明,通过B-S系统的多级放大作用,本实验的检测极限提高了3个数量级达到38.02 fM,并显示出良好的特异性和可靠性。2、基于SiC@Ag基底和银-生物素-链酶亲和素纳米聚集体双重SERS放大特性的mir-106a检测分析与上述类似,采用EBPVD技术在碳化硅砂纸表面沉积一层100 nm厚的银膜,并在银膜表面固定捕获DNA作为基底,构建基底-靶分子-探针的三明治结构进行SERS检测,并经B-S系统的一次信号放大,检测限即达到0.60 fM,也显示出良好的特异性和可靠性。由上可见,将B-S系统放大技术与基于SERS的检测技术相结合,对于获得高灵敏的肿瘤标志物检测具有重要参考价值。

论文目录

  • 摘要
  • abstract
  • 引言
  • 1 绪论
  •   1.1 光的散射
  •   1.2 拉曼散射和表面增强拉曼散射
  •     1.2.1 拉曼散射
  •     1.2.2 表面增强拉曼散射(SERS)
  •   1.3 SERS技术在核酸定量检测中的应用研究
  •     1.3.1 无标记检测
  •     1.3.2 标记检测
  •   1.4 生物素-链霉亲和素系统的应用研究
  •   1.5 论文的选题意义及主要内容
  • 2 基于银-生物素-链霉亲和素纳米聚集体SERS放大特性的miRNA-21 检测分析
  •   2.1 引言
  •   2.2 实验部分
  •     2.2.1 实验药品及仪器
  •     2.2.2 银纳米粒子的合成
  •     2.2.3 Ag@4MBA@DNA-生物素探针的制备
  •     2.2.4 Si@Ag@抗地高辛/地高辛-DNA基底的制备
  •     2.2.5 检测方案
  •   2.3 结果与讨论
  •     2.3.1 银纳米粒子和Ag@4MBA@DNA-生物素探针的表征
  •     2.3.2 Si@Ag@抗地高辛/地高辛-DNA基底的表征
  •     2.3.3 探针DNA浓度的优化
  •     2.3.4 miRNA-21 的检测与分析
  •   2.4 本章小结
  • 3 基于SiC@Ag基底和银-生物素-链酶亲和素纳米聚集体双重SERS放大特性的mir-106a检测分析
  •   3.1 引言
  •   3.2 实验部分
  •     3.2.1 试剂与仪器
  •     3.2.2 Ag NPs的合成
  •     3.2.3 Ag@4MBA@DNA-biotin探针的制备
  •     3.2.4 SiC@Ag@anti-digoxin/digoxin-DNA基底的制备
  •     3.2.5 检测方案
  •   3.3 结果与讨论
  •     3.3.1 Ag NPs和 Ag@4MBA@DNA-biotin探针的表征
  •     3.3.2 SiC@Ag基底的SERS性能表征
  •     3.3.3 miRNA-106a的检测与分析
  •   3.4 本章小结
  • 4 总结与展望
  •   4.1 总结
  •   4.2 展望
  • 参考文献
  • 在学研究成果
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 梁照恒

    导师: 周骏

    关键词: 表面增强拉曼散射,三明治结构,高灵敏检测

    来源: 宁波大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 物理学,肿瘤学

    单位: 宁波大学

    分类号: R730.4;O436.2

    DOI: 10.27256/d.cnki.gnbou.2019.000680

    总页数: 55

    文件大小: 3247K

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