选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂-1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞增殖及α平滑肌肌动蛋白、纤维酶原激活物抑制剂-1和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

论文摘要

目的观察选择性上调pSmad 3C/3L基因对人肝星状细胞(LX-2)增殖及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ)表达的影响。以进一步探究pSmad 3C/3L在肝纤维化进展中的作用机制。方法采用脂质体转染的技术(FuGENE?HD)向LX-2细胞转染野生型Smad3基因(Smad3 WT)、Smad3连接区磷酸化位点突变的基因(Smad3 EPSM)及Smad3 C末端磷酸化位点突变的基因(Smad3 3S-A)3种质粒,选择性上调LX-2细胞中pSmad 3C/3L的表达水平,以蛋白质印迹法(Western Blot)验证转染效率并检测LX-2细胞中α-SMA、PAI-1和Collagen-Ⅰ的蛋白表达水平。MTT法检测选择性上调pSmad 3C/3L对LX-2细胞增殖能力的影响。结果转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激1 h后,与LX-2对照组相比,转染3种质粒组Smad3蛋白表达水平均升高[(0.48±0.02),(0.57±0.03),(0.60±0.02),(0.59±0.03);P<0.05];与Smad3WT组相比,转染Smad3 EPSM质粒组p Smad3C蛋白表达水平明显升高[(0.33±0.02)比(0.44±0.01),P<0.05],转染Smad3 3SA质粒组pSmad3L蛋白表达水平明显升高[(0.36±0.01)比(0.42±0.02),P<0.05]。MTT结果显示,转染Smad3 EPSM质粒可抑制LX-2细胞增殖,而转染Smad3 3S-A质粒可促进LX-2细胞的增殖[吸光度值(0.48±0.03)比(0.93±0.05),P<0.05]。TGF-β1刺激12 h后,α-SMA、PAI-1和Collagen-Ⅰ在3种质粒转染组中呈现出差异表达(P<0.05)。结论转染3种质粒成功地选择性上调了LX-2细胞中pSmad 3C/3L的表达,选择性高表达pSmad3L可进一步促进TGF-β1诱导的细胞增殖反应、促进α-SMA、PAI-1和Collagen-Ⅰ的表达,选择性高表达pSmad3C可抑制细胞增殖反应、降低α-SMA、PAI-1和Collagen-Ⅰ的表达;提示TGF-β1诱导的Smad3不同位点磷酸化在LX-2细胞增殖和α-SMA,PAI-1,Collagen-Ⅰ蛋白表达的调控中发挥重要作用,为肝纤维化的逆转提供了新思路。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 仪器与试剂
  •   1.2 细胞株
  •   1.3 选择性上调pSmad3C/L的LX-2细胞系的建立
  •     1.3.1细胞培养与实验分组
  •     1.3.2 Smad3 WT、Smad3 EPSM和Smad3 3S-A质粒转染LX-2细胞
  •   1.4 MTT法检测转染3种质粒对细胞增殖能力的影响
  •   1.5 蛋白质印迹法检测LX-2细胞中相关蛋白表达水平
  •   1.6统计学方法
  • 2 结果
  •   2.1 Smad3 WT、Smad3 EPSM和Smad3 3S-A 3种质粒转染LX-2细胞的结果
  •   2.2 选择性上调pSmad 3C/3L对LX-2细胞增殖能力的影响
  •   2.3 选择性上调pSmad
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 徐媛媛,闻广华,张冲,杨雁

    关键词: 肝硬化,肝星状细胞,质粒,转染,蛋白质,转化生长因子,脂质体,细胞增殖,印迹法

    来源: 安徽医药 2019年12期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 消化系统疾病

    单位: 安徽医科大学药理学教研室和天然药物研究所

    基金: 国家自然科学基金面上项目(81573652,81874354)

    分类号: R575.2

    页码: 2351-2355

    总页数: 5

    文件大小: 1556K

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