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PEDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立

2020-12-02阅读(121)

PEDV双抗体夹心ELISA检测方法的建立

论文摘要

为了快速检测猪流行性腹泻病毒,本研究以纯化的家兔抗猪流行性腹泻病毒多隆抗体为捕获抗体,以小鼠抗猪流行性腹泻单克隆抗体为检测抗体,并对单克隆抗体进行HRP标记,由此建立了双抗体夹心ELISA（DAS-ELISA）检测法,检测抗体的最佳工作浓度为浓度为0.75ug/m L。当D450≥0.233且P/N≥2时判定为阳性。该方法特异性强,与猪传染性胃肠炎、猪轮状病毒均无交叉反应,最低检测量为3.125×103TCID50/m L。该方法重复性较好:批间和批内重复率均小于10%,临床样品检测结果与RT-PCR方法比较,符合率为90.5%。上述结果表明,本研究建立的检测猪流行性腹泻病毒的双抗体夹心ELISA特异性强、灵敏度高,可用于对猪粪样中PEDV的检测。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 细胞、病毒及实验动物
  •   1.2 试剂及器材
  •   1.3 单克隆抗体腹水的制备、纯化及HRP标记
  •   1.4 抗体最佳工作浓度的确定
  •   1.5 各组分最适工作条件的确定
  •     1.5.1 兔抗PEDV多抗包被条件的确定
  •     1.5.2 封闭条件的确定
  •     1.5.3待检样品反应条件的确定
  •     1.5.4 双抗体夹心ELISA方法Cut off值的确定
  •   1.6 双抗体夹心ELISA方法的灵敏性试验
  •   1.7 双抗体夹心ELISA方法的特异性试验
  •   1.8 双抗体夹心ELISA方法的重复性试验
  •     1.8.1 板内重复性试验
  •     1.8.2 板间重复性试验
  •   1.9 双抗体夹心ELISA方法检测临床样品
  • 2 结果与分析
  •   2.1 单克隆抗体效价及蛋白浓度
  •   2.2 家兔抗PEDV多抗与单克隆抗体最佳工作浓度的确定
  •   2.3 各组分最佳条件的确定
  •     2.3.1 最佳包被条件
  •     2.3.2 最佳封闭条件的确定
  •     2.3.3 检测样品反应条件的确定
  •     2.3.4 双抗体夹心ELISA方法判断标准确定
  •   2.4 双抗体夹心ELISA方法灵敏性试验
  •   2.5 双抗体夹心ELISA方法特异性试验
  •   2.6 双抗体夹心ELISA的重复性试验
  •   2.7 临床样品的检测
  • 3 讨论

    • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 马宇聪,刘增素,王书博,周晗,姜艳萍,崔文,王丽,乔薪瑗,唐丽杰,徐义刚,李一经

    关键词: 猪流行性腹泻病毒,单克隆抗体,双抗体夹心

    来源: 中国兽医科学 2019年09期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 东北农业大学动物医学学院

    基金: 国家重点研发计划项目（2016YFD0500704-3）

    分类号: S852.651

    DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0143

    页码: 1152-1159

    总页数: 8

    文件大小: 1671K

    下载量: 347

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