黑曲霉酸性蛋白酶EXPA的克隆表达与酶学性质解析

黑曲霉酸性蛋白酶EXPA的克隆表达与酶学性质解析

论文摘要

酸性蛋白酶在食品、酿造、饲料和皮革等行业具有重要的应用价值。然而,现有的酸性蛋白酶在50℃以上或pH> 3. 0时不稳定,限制了其应用范围。该研究通过分子克隆技术将黑曲霉CICIM F0510的酸性蛋白酶基因exp A在毕赤酵母中进行了克隆表达,构建获得了重组菌GS115 (p PIC-expA)。摇瓶发酵条件下,重组酶EXPA的酶活为257 380 RFU/h。生物信息学分析的结果显示,该酶属于天冬氨酸蛋白酶A1A家族。酶学性质的研究表明,该重组酶的最适反应温度和pH分别为50℃和3. 0;分别在40~50℃或pH 2. 5~3. 5孵育1 h后,仍能保留80%左右的活力。Zn2+、Ca2+、Fe2+和Mn2+对其活性有一定的促进作用;而Cu2+、Co2+、Fe3+、EDTA和SDS则对其活性有显著的抑制作用。此外,重组酶EXPA对大豆分离蛋白、水溶性玉米蛋白和小麦水解蛋白均具有较好的水解作用。较好的耐热性和pH稳定性为EXPA在食品、饲料等领域的应用奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株、质粒及培养条件
  •     1.1.2 试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 重组菌的构建
  •     1.2.2 重组酶的分泌表达与初步纯化
  •     1.2.3 重组酸性蛋白酶的酶学性质解析
  •       1.2.3. 1 酸性蛋白酶的酶活测定
  •       1.2.3. 2 最适作用温度和热稳定性的测定
  •       1.2.3. 3 最适作用pH值和pH稳定性的测定
  •       1.2.3. 4 金属离子和相关化学试剂对酶活的影响
  •       1.2.3. 5 重组酶对不同蛋白质的水解作用
  •     1.2.4 生物信息学分析
  • 2 结果
  •   2.1 黑曲霉酸性蛋白酶基因expA的克隆与分析
  •   2.2 重组酸性蛋白酶的分泌表达与分离纯化
  •   2.3 重组酶EXPA的酶学性质解析
  •     2.3.1 重组酶EXPA的最适作用温度与热稳定性
  •     2.3.2 最适反应p H和p H稳定性
  •     2.3.3 金属离子和化学物质对EXPA酶活的影响
  •     2.3.4 重组酶EXPA对不同底物的水解能力
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王鑫,金鹏,宋鹏,董自星,刘晓光,王正祥

    关键词: 酸性蛋白酶,黑曲霉,分子克隆,酶学特征

    来源: 食品与发酵工业 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学,轻工业手工业

    单位: 工业发酵微生物教育部重点实验室(天津科技大学),天津科技大学化工与材料学院

    基金: 天津市高等学校创新团队培养计划<,酶与生物催化关键技术>,(TD12-5002),天津市国际交流与合作项目(14RCG HSY00181)

    分类号: Q55;TS201.25

    DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018387

    页码: 40-46

    总页数: 7

    文件大小: 3093K

    下载量: 294

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