论文摘要
【目的】构建proEM-bPAG9重组表达载体,并在HEK293细胞中转染表达。为进一步抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研究奠定基础。【方法】通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG9全基因序列,经双酶切法将bPAG9基因插入到表达载体proEM中,构建proEM-bPAG9重组载体后转到DH5α感受态细胞中,重组质粒转染至哺乳动物细胞HEK293中进行瞬时表达,再通过亲和层析纯化bPAG9重组蛋白（rbPAG9）,经SDS-PAGE和Western Blot检测rbPAG的表达效果。【结果】通过全基因合成法得到1 182 bp的bPAG9基因片段,构建的重组质粒proEM-bPAG9经双酶切获得约4 369 bp和1 176 bp的两条片段,与预期值相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致,氨基酸未发生突变;SDS-PAGE和Western Blot鉴定显示,获得相对分子质量约为68 kDa的bPAG9重组蛋白,通过Ni2+亲和层析纯化后,rbPAG9纯度可达90%。【结论】通过基因优化及真核表达获得分子质量为68 kDa的rbPAG9重组蛋白。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 刘长彬,石国庆,卢春霞
关键词: 牛妊娠相关糖蛋白,重组蛋白,真核表达
来源: 新疆农业科学 2019年08期
年度: 2019
分类: 农业科技,基础科学
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 石河子大学动物科技学院,省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院,长江师范学院现代农业与生物工程学院
基金: 国家自然科学基金(31860647)~~
分类号: Q78;S823
页码: 1552-1559
总页数: 8
文件大小: 1249K
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标签：牛妊娠相关糖蛋白论文; 重组蛋白论文; 真核表达论文;