荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌

论文摘要

目的研制荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌。方法采用双抗夹心免疫吸附法筛选7株抗单核细胞增生李斯特菌的单克隆抗体,获得最佳配对抗体10E7H6和10A11。以生物素化的10A11为检测抗体,10E7H6为捕获抗体,建立了基于链霉亲和素标记荧光微球为检测探针的荧光免疫吸附法检测单核细胞增生李斯特菌。结果该方法中最佳捕获抗体浓度为10μg/mL,最佳检测抗体浓度为5μg/mL,反应最佳pH为7.4;在该条件下,单核细胞增生李斯特菌最低检测限为10~5 CFU/mL,比传统酶联免疫吸附法提高了两个数量级;与李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌有一定的交叉反应,与其他非李斯特菌属的主要致病菌无显著交叉反应。结论该方法可用于纯培养液中单核细胞增生李斯特菌的检测,也可用于李斯特菌属内其他几种主要李斯特菌的免疫学快速筛查检测。

论文目录

1 材料与方法

1.1 菌株

1.2 试剂和仪器

1.3 配对抗体的筛选

1.3.1 生物素化抗体的合成

1.3.2 抗体配对筛选

1.3.3 最佳配对抗体鉴定

1.3.4 棋盘滴定法确定最佳抗体使用浓度

1.4 传统酶联免疫吸附法的建立

1.5 荧光微球与链霉亲和素的偶联和表征

1.6 荧光免疫吸附法反应pH的优化

1.7 荧光免疫吸附法检测单核细胞增生李斯特菌标准曲线的建立

1.8 荧光免疫吸附法的特异性评价

2 结果

2.1 配对抗体的筛选

2.1.1 抗体配对筛选

2.1.2 最佳配对抗体的鉴定

2.1.3 棋盘确定最佳捕获和检测抗体反应浓度

2.2 传统酶联免疫吸附法的检测曲线

2.3 荧光微球与链霉亲和素的偶联和表征

2.4 荧光免疫吸附法反应pH的优化

2.5 荧光免疫吸附法检测单核细胞增生李斯特菌标准曲线的建立

2.6 荧光免疫吸附法的特异性评价

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄伟华,李伦,陈超超,陈雪岚

关键词: 单核细胞增生李斯特菌,荧光微球,荧光免疫吸附法,酶联免疫吸附法

来源: 卫生研究 2019年02期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业,预防医学与卫生学,临床医学

单位: 江西师范大学生命科学学院

基金: 国家自然科学基金(No.31660019),江西省科技厅“5511”优势科技团队项目(No.20165BCB19004)

分类号: R155.5;R446.6

DOI: 10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2019.02.015

页码: 279-283+294

总页数: 6

文件大小: 176K

下载量: 150

荧光免疫吸附法定量检测单核细胞增生李斯特菌

论文摘要

论文目录

文章来源

相关论文文献

猜你喜欢