猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株Nsp8基因分析及真核表达

猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株Nsp8基因分析及真核表达

论文摘要

应用生物信息工具和分子克隆技术对PEDV SHpd/2012株Nsp8基因编码的蛋白进行了结构和功能分析以及体外表达。结果显示,NSP8蛋白是一个含有194个氨基酸的亲水性蛋白,不含信号肽和跨膜区。SHpd/2012毒株高度保守的NSP8氨基酸序列与CV777、AJ1102等毒株同源性高。NSP8蛋白也是一个单体蛋白,共有5个优势抗原表位。此外,本研究成功地在293T细胞内表达了NSP8蛋白,为进一步研究猪流行性腹泻病毒NSP8蛋白的功能提供了理论基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 毒株、细胞、质粒
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 实验仪器
  •   1.4 PEDV NSP8蛋白氨基酸序列分析及蛋白结构预测
  •   1.5 PEDV NSP8蛋白的真核表达
  •     1.5.1 引物设计
  •     1.5.2 总RNA的提取及cDNA的反转录
  •     1.5.3 目的基因的扩增及与载体的连接
  •     1.5.4 重组阳性克隆的筛选及测序
  •     1.5.5 质粒转染及蛋白提取
  •     1.5.6 蛋白免疫印迹 (Western blot)
  • 2 结果与分析
  •   2.1 NSP8蛋白理化性质
  •   2.2 NSP8蛋白氨基酸序列分析
  •   2.3 NSP8氨基酸修饰位点预测
  •   2.4 NSP8蛋白二级结构预测
  •   2.5 NSP8蛋白三级结构及B细胞抗原表位预测
  •   2.6 Nsp8基因PCR扩增
  •   2.7 NSP8蛋白免疫印迹鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 丁思嘉,罗依然,周书亭,马世文,蒲良,杨亮,刘源平,蒋升瑶,叶力波利·达吾力,杨志彪

    关键词: 猪流行性腹泻病毒,基因,真核表达

    来源: 上海交通大学学报(农业科学版) 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室

    基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500100),国家自然科学基金(31472211)

    分类号: S852.651

    页码: 64-69

    总页数: 6

    文件大小: 1002K

    下载量: 84

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    猪流行性腹泻病毒SHpd/2012株Nsp8基因分析及真核表达
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