大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的克隆和表达

大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的克隆和表达

论文摘要

为了更好地研究磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的结构和功能,采用PCR(聚合酶链式反应)、双酶切和细胞转化等基因工程方法对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因进行克隆并使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行表达分析,扩增出一个新的大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因,将其基因克隆到原核表达载体pET-30a上,并导入到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中。通过IPTG诱导成功表达出大肠杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。所提出的方法能够高效表达磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶,为进一步大规模表达纯化和应用提供参考。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 PCR扩增
  •     1.2.2 重组表达载体pET-30a-pepc的构建
  •     1.2.3 PEPC酶的表达
  • 2 结果与分析
  •   2.1 大肠杆菌pepc基因的克隆
  •     2.1.1 大肠杆菌基因组DNA的提取
  •     2.1.2 pepc基因的PCR扩增
  •     2.1.3 重组表达载体pET-30a-pepc
  •     2.1.4 双酶切验证
  •     2.1.5 重组质粒的测序验证
  •   2.2 重组表达载体pET-30a-pepc在大肠杆菌中的表达
  • 3 结 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 何晓亮,李竹,梁立强,孟万利,苗兰天,孙耀祖,蔡红光

    关键词: 基因工程,大肠杆菌,磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶,基因表达,二氧化碳

    来源: 河北科技大学学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 河北科技大学生物科学与工程学院

    基金: 河北省自然科学基金(C2014208093)

    分类号: Q55;Q78

    页码: 133-137

    总页数: 5

    文件大小: 1748K

    下载量: 217

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