论文摘要
【目的】研究柑橘凤蝶Papilio xuthus细胞系RIRI-PX1的单细胞克隆株RIRI-PX1-C24的生物学和重组蛋白表达特性。【方法】用野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（wild-type Autographa californica multiple nucleopolyhedrosis virus, wt-AcMNPV）侵染RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1,检测细胞对野生型病毒的敏感性;使用重组绿色荧光蛋白杆状病毒（AcMNPV-GFP）、重组β-半乳糖苷酶杆状病毒（AcMNPV-Gal）以及重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒（AcMNPV-SEAP）分别侵染细胞系RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1,在之后的24, 48, 72, 96, 120, 144和168 h检测3种重组蛋白的表达量;通过简单重复序列区间（inter simple sequence repeat, ISSR）标记比较RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1的遗传相似性。【结果】亲本细胞系RIRI-PX1和克隆株RIRI-PX1-C24均能被wt-AcMNPV侵染,其中RIRI-PX-C24对wt-AcMNPV的敏感性较RIRI-PX1有显著提高。3种重组蛋白均能在2个细胞系中表达,其中重组绿色荧光蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平远高于在亲本细胞系RIRI-PX1中的表达水平,但重组β-半乳糖苷酶蛋白和重组分泌型碱性磷酸酶蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平较在RIRI-PX1中的无显著提高。用10条ISSR引物进行的RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1 2个细胞系的指纹图谱分析中,4条引物扩增条带在这2个细胞系间存在差异;2个细胞系的遗传相似性范围在0～83.33%之间,说明克隆株及其亲本细胞系在基因型上存在差异。【结论】通过对柑橘凤蝶细胞系RIRI-PX1进行单细胞克隆,确实获得了使重组绿色荧光蛋白表达水平有显著提高的克隆株RIRI-PX1-C24,其利用价值仍需进一步的研究。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 孙娜,丁伟峰,刘志刚,张欣,李娴,冯颖
关键词: 柑橘凤蝶,单细胞克隆,重组杆状病毒,重组蛋白,简单重复序列区间
来源: 昆虫学报 2019年03期
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学
单位: 中国林业科学研究院资源昆虫研究所国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室
基金: 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金(CAFYBB2016ZD005)
分类号: Q962
DOI: 10.16380/j.kcxb.2019.03.004
页码: 304-311
总页数: 8
文件大小: 4457K
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标签：柑橘凤蝶论文; 单细胞克隆论文; 重组杆状病毒论文; 重组蛋白论文; 简单重复序列区间论文;