自体富含血小板血浆（PRP）促进内皮祖细胞（EPCs）功能表达的研究

论文摘要

[目的]:本文通过研究自体富含血小板血浆（PRP）对内皮祖细胞增殖、迁移、粘附及分化的影响,以期获得一种安全有效的内皮祖细胞（EPCs）扩增方法。[方法]:通过手动离心法获得富含血小板血浆,并通过草酸铵法计算血小板回收率及富集率评估PRP质量。通过外周血离心并体外培养获取内皮祖细胞。采用CD31免疫荧光染色、DiI-AC-LDL吞噬实验和FITC-UEA-1结合实验进行免疫学鉴定。将实验基本分为ECM、ECM+配套生长因子、ECM+PRP（10ul/ml）,ECM组只含ECM基础培养基+5%胎牛血清+1%双抗,不加入配套的生长因子添加剂。ECM+配套生长因子组即为ECM完全培养基,ECM+PRP组为ECM组基础上增加激活PRP萃取液（10ul/ml）。通过MTT法检测细胞活性,Transwell小室及细胞粘附实验检测细胞迁移及粘附功能。通过RT-PCR法检测细胞CD34、CD45分子表达情况从而了解PRP对EPCs分化的影响。在RT-PCR实验中,增加利用ECM完全培养基原代培养7-9天的贴壁细胞作为原代细胞组。[结果]:全血中血小板浓度约为164.43±14.69（×109）（N=12）,血小板浓聚物浓度约为1045.24±99.36（×109）（N=12）,血小板回收率约为79%,富集率约为6.36（×102）。试验细胞CD31荧光染色、吞噬DiI-AC-LDL和结合FITC-UEA-1荧光染色呈阳性,证实为EPCs。MTT法结果:第一天ECM组（0.18±0.139）、ECM+配套生长因子组（0.22±0.020）、ECM+PRP（10ul/ml）（0.22±0.198）组整体比较有统计学意义（P<0.01）（N=12）。ECM+PRP（10ul/ml）组与ECM+配套生长因子组两两比较无统计学差异,ECM+PRP（10ul/ml）组、ECM+配套生长因子组各与ECM组两两比较均有统计学差异（P<0.01）。第7天ECM+PRP（10ul/ml）组 A 值（0.76±0.020）、ECM+配套生长因子组（0.66±0.019）、ECM组（0.36±0.016）及第14天ECM+PRP（10ul/ml）组（0.90±0.052）、ECM+配套生长因子组（0.76±0.023）、ECM组（0.45±0.024）三组整体比较、两两比较均有差异（P<0.01）。粘附:ECM+PRP（10ul/ml）组（27.67±2.11）、ECM+配套生长因子组（27.37±1.30）与ECM组（18.67±1.45）（N=12）三组整体比较有统计学差异。ECM+PRP（10ul/ml）组、ECM+配套生长因子组各与ECM组两两比较均有统计学差异（P<0.01）,ECM+PRP（10ul/ml）组、ECM+配套生长因子组之间两两比较无统计学差异。迁移:ECM+PRP（10ul/ml）组（22.13±0.93）、ECM+配套生长因子组（17.43±0.53）与 ECM 组（9.87±0.46）（N=12）三者比较,三者均有差异,ECM+PRP（10ul/ml）组（22.13±0.93）、ECM+配套生长因子组（17.43±0.53）均大于ECM组（9.87±0.46）,其中以ECM+PRP（10ul/ml）组（22.13±0.93）迁移细胞数目最多。提示PRP能够使得EPC细胞迁徙能力明显提高。RT-PCR结果:在CD34表达中,四个实验组整体比较有统计学差异（P<0.01）。原代细胞组、ECM组与ECM+配套生长因子组三组整体比较有统计学差异（P<0.01）。ECM+PRP组与ECM+配套生长因子组两两比较有统计学差异（P<0.01）,原代细胞组与ECM组两两比较无统计学差异。在CD45的表达中,四组整体比较有统计学差异（P<0.01）。原代细胞组、ECM组ECM+配套生长因子组三组整体比较有统计学差异（P<0.01）,ECM+PRP组与ECM+配套生长因子组两两比较有统计学差异（P<0.01）。[结论]:统计分析结果提示:采用Aghaloo法获取的血小板浓聚物能够达到PRP的标准。PRP作为培养基生长因子替代品,其促进EPCs的增殖、迁移及分化的能力比配套生长因子强,而对EPCs粘附的影响两者效果无差异。PRP是EPCs体外培养中具有潜力的生长因子替代品。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 王小康

导师: 赵娴

关键词: 富小板血浆,内皮祖细胞,细胞培养,培养基,生长因子

来源: 昆明医科大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 昆明医科大学

基金: 国家自然科学基金(81460296),云南省卫生科技后备人才计划(H-201631)

分类号: R329.2

DOI: 10.27202/d.cnki.gkmyc.2019.000743

总页数: 56

文件大小: 3158K

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