一、Expression of Tissue Transglutaminase in Cultured Bovine Trabecluar Meshwork Cells（论文文献综述）
惠鹏[1]（2020）在《microRNA-200a对慢性高眼压小鼠视网膜的保护作用及其机制研究》文中指出青光眼是一类多种病因造成的以视神经改变及视野损害为特征的视神经退行性疾病的统称,目前已成为全球首位不可逆性的致盲性眼病。虽然青光眼的发病机制一直是研究的热点,但到目前为止青光眼的发病机制仍不明确。已有研究表明micro RNAs（mi Rs）参与调节眼压变化。然而,mi R-200a在青光眼中的作用尚未得到很好的研究。目的:探究mi R-200a通过调控FGF7对慢性高眼压小鼠视网膜的作用及其相关机制,为青光眼疾病治疗提供新靶点。方法:首先,利用微阵列表达谱筛选出青光眼相关差异性表达基因,利用生物信息学分析确立后续研究的基因FGF7。进一步应用生物信息学分析和双荧光素酶基因检测法验证mi R-200a与FGF7的靶向调控关系。随后对慢性高眼压小鼠进行分组进行体内、体外研究青光眼的相关视网膜神经损伤改变。分别应用HE染色的实验方法,研究上调的mi R-200a或下调的FGF7对视网膜的结构和形态的影响。应用免疫组化、TUNEL法和MTT法,研究上调的mi R-200a或下调的FGF7对CD11b和i NOS表达、视网膜神经节细胞凋亡、Müller细胞存活。最后利用RT-q PCR和Western Blot法检测各组中,mi R-200a、FGF7及MAPK信号通路（ERK、JNK、p38）中的m RNA及其磷酸化后蛋白表达。结果:mi R-200a在慢性高眼压小鼠的视网膜中表达减少,同时FGF7被强力诱导表达增加。因此,我们推测FGF7受mi R-200a负调控。在体内、体外实验中,下调mi R-200a可以增加CD11b和i NOS的表达,促进RGCs的凋亡,刺激Müller细胞失活。然而,在FGF7抑制后,mi R-200a下调引起的上述变化被逆转。下调mi R-200a可以通过上调FGF7激活MAPK信号通路,使ERK、JNK、p38和Bax表达升高和Bcl-2表达降低。因此,证明mi R-200a可抑制FGF7介导的MAPK信号通路。结论:我们的研究证明在慢性高眼压小鼠视网膜中,mi R-200a可以通过靶向抑制FGF7介导的MAPK信号通路,对青光眼造成的视神经损害起神经保护作用。使得mi R-200a可能成为青光眼疾病治疗的新靶点。
刘云[2]（2020）在《氧化应激在绝经后骨质疏松中发病机理的作用及王不留行黄酮苷的干预机制研究》文中指出第一部分基于UPLC-Q-TOF/MS的代谢组学技术在绝经后骨质疏松症的发病机制中的研究目的:采用代谢组学技术鉴定绝经后骨质疏松症潜在的生物标志物,进而探索这些差异性表达的标志物对绝经后骨质疏松症发病机制的影响。方法:收集2019年1月10日至2020年1月20日在我院门诊体检的健康人和住院的患者基本信息,骨密度结果和血浆,并根据骨密度的检查结果将研究对象分为骨密度正常组37例,绝经后骨质疏松症组33例,采用UPLCQ-TOF/MS代谢组学技术对纳入研究对象的血浆进行分析。结果:与骨密度正常的健康人相比,绝经后骨质疏松症患者血浆中共鉴定出26个潜在的生物标志物,排除重复后共有23种生物标志物,其中18种生物标志物上调,5种生物标志物下调。根据鉴定出的潜在生物标志物,进一步采用Metabo Analyst 4.0对生物标志物涉及的代谢通路进行归属和富集,分析发现这些生物标志物的变化可能影响以下5条通路:（1）、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成;（2）、苯丙氨酸代谢;（3）、鞘脂类代谢;（4）、酪氨酸代谢;（5）、甘油磷脂代谢,归纳起来主要涉及氨基酸代谢、甘油磷脂代谢和鞘脂类代谢。结论:基于UPLC-Q-TOF/MS代谢组学技术可以有效鉴定出绝经后骨质疏松症患者血浆中的生物标志物和其影响的信号通路,这将有助于寻找绝经后骨质疏松症的分子靶标和研究其潜在的发病机制。第二部分炎症介导的氧化应激在绝经后骨质疏松症发病机理中的临床研究目的:检测绝经后骨质疏松症患者血浆中炎症因子和抗氧化酶的表达水平,探索炎症介导的氧化应激在绝经后骨质疏松症发病机理中的作用。方法:本研究回顾性分析了2012年5月22日至2020年1月20日在我院住院治疗的绝经后骨质疏松症的患者的临床资料,同时从2019年1月10日至2020年1月20日收集在我院门诊体检的健康人和住院绝经后骨质疏松患者的血浆样本。将收集的血浆进行ELISA检测,检测的指标包括炎症指标:RANKL,TNF-α和IL-1;抗氧化酶指标:Catalase,Ho-1和Sod2。在此基础上,对年龄,BMI指数,血小板计数,白蛋白水平,中性细胞计数,淋巴细胞计数,单核细胞计数、中性粒细胞/淋巴细胞比（neutrophil-tolymphocyte ratio,NLR）、血小板/淋巴细胞比（platelet-to-lymphocyte ratio,PLR）、淋巴细胞/单核细胞比（lymphocyte-to-monocyte ratio,LMR）、系统免疫性炎症指数（systemic immune-inflammation index,SII）进行单因素和多因素分析。并根据单因素分析的结果进一步行ROC曲线诊断性分析,寻找炎症指标诊断绝经后骨质疏松症的最佳截断值。结果:根据纳入和排除标准,本研究共纳入健康人50例,骨质疏松症患者111例和严重骨质疏松症患者84例,其中收集到血浆样品60例,分别为骨密度正常组20例,骨质疏松症组20例和严重骨质疏松症组20例。ELISA检测发现:与骨密度正常组相比,炎症指标如RANKL,TNF-α,IL-1和骨质疏松的严重程度成正比;进一步检测抗氧化酶指标Catalase,Ho-1和Sod2时,同样发现患者血浆中抗氧化酶的水平随着骨质疏松程度加重而升高。同时,单因素分析发现:白蛋白水平、BMI、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、NLR、PLR、LMR和SII等8个指标是绝经后骨质疏松的危险因素。多因素分析发现白蛋白水平仍为绝经后骨质疏松的独立危险因素。在ROC曲线诊断性分析中,当SII值高于403.6926,NLR值大于1.4386时,诊断绝经后骨质疏松方面有较高的准确性。结论:外周血的炎症因子介导的氧化应激与绝经后骨质疏松症发生存在一定的关系。炎症指标其作为一个简单易获得的临床指标,在预测绝经后骨质疏松症的发生具有一定的诊断意义。第三部分王不留行王酮苷治疗绝经后骨质疏松症的网络药理学研究目的:基于网络药理学技术预测王不留行黄酮苷和绝经后骨质疏松症的交集靶标,探究王不留行黄酮苷治疗绝经后骨质疏松症的潜在分子机制。方法:通过采用网络药理学和生物信息学的相关手段,对药物疾病靶点进行预测,明确王不留行黄酮苷治疗绝经后骨质疏松症的特异性靶点,通过GO的生物过程分析和KEGG通路富集分析探究其潜在的分子机制。结果:首先,通过在线检索药物和疾病数据库,预测出王不留行黄酮苷与骨质疏松症交集的靶点基因为28个。其次,通过构建中草药单体-疾病靶标的蛋白互作网络,筛选出6个靶标蛋白（IL-6、TNF、VEGFA、HSP90AA1、CREB1和IL2）可能为王不留行黄酮苷治疗骨质疏松症的关键靶点。进一步对交集靶标蛋白进行GO生物学功能分析时发现,这些靶标蛋白主要参与细胞凋亡、血管新生、脂质分解代谢过程、破骨细胞分化、胰岛素分泌、内皮细胞迁移、细胞对过氧化氢的反应等生物学过程。最后,进行KEGG通路富集分析时发现王不留行黄酮苷可能通过影响22条信号通路发挥抗骨质疏松症作用,这些信号通路归纳起来可分为影响骨重建细胞的分化和凋亡、纠正内分泌代谢紊乱、抑制炎症反应和与其他疾病相互影响等4类信号通路。结论:王不留行黄酮苷治疗绝经后骨质疏松症具有多靶点,多通路的特点;其机制可能涉及细胞凋亡、血管新生、脂质分解代谢、破骨细胞分化等生物学过程,与目前抗骨质疏松的作用主要机制相符合。第四部分王不留行黄酮苷通过减少氧化应激来抑制破骨细胞形成和预防OVX诱导骨质疏松的研究目的:王不留行黄酮苷是中药王不留行的主要活性成份,既往文献报道有抗氧化、抗炎和促进血管新生等作用,但是否防治绝经后骨质疏松症尚未明确。本研究旨在探讨王不留行黄酮苷是否通过抑制ROS水平来减少氧化应激介导的破骨细胞形成和预防OVX小鼠诱导的骨质疏松。方法:体外提取培养C57BL/6小鼠的骨髓巨噬细胞（BMMs）,在RANKL的诱导下,加入不同浓度的王不留行黄酮苷（0,5,10和20μM）培养5天或在第1、3、5天分别加入20μM的王不留行黄酮苷干预24 h,确定药物影响破骨细胞形成的有效抑制浓度和阶段;BMMs接种于共聚焦皿上,用RANKL诱导,同时加入不同浓度的王不留行黄酮苷（0,5和10μM）培养5天,应用酸染色和鬼笔环肽/DAPI/CTSK染色,在共聚焦显微镜下拍照,观察王不留行黄酮苷对成熟破骨细胞的酸分泌以及CTSK和F-actin共定位的影响;BMMs接种于6孔板中诱导成小破骨细胞生成,之后消化接种到96孔的羟基磷灰石骨板上,加入王不留行黄酮苷（0,10和20μM）进行干预,3天后在显微镜下拍照,并计算骨吸收面积。运用q RT-PCR检测王不留行黄酮苷对破骨细胞形成相关基因（Acp5、Atp6v0d2、Ctsk和Mmp9）和ROS相关通路基因（Nrf2、keap1、Nox1、Sod2、Catalae和Ho-1）的表达;运用Western Blot技术检测王不留行黄酮苷对RANKL诱导的细胞信号通路的影响,包括ROS、NF-κB和MAPK信号通路的影响,尝试寻找王不留行黄酮苷的作用靶点。建立卵巢切除后的小鼠骨质疏松动物模型,分为3组,包括假手术组、OVX组和药物组,王不留行黄酮苷（5 mg/kg）干预8周,处死动物前24 h腹腔注射ROS探针,Micro-CT扫描分析各组腰椎和股骨远端的骨组织情况,并进行骨皮质和松质骨参数的统计分析。通过病理组织切片H&E、TRAc P染色分析各组腰椎和股骨远端骨组织破坏情况。通过股骨远端ROS的探针的荧光强度分析王不留行黄酮苷对动物体内ROS的影响情况。结果:破骨细胞形成实验显示王不留行黄酮苷（0,5、10和20μM）呈浓度依赖性抑制破骨细胞的生成;细胞毒性实验显示在48 h内,王不留行黄酮苷浓度≤40μM对破骨前体细胞无毒性作用。酸化实验的结果表明王不留行黄酮苷（5和10μM）可以有效抑制破骨细胞的酸分泌,CTSK和Facting共定位的结果表明王不留行黄酮苷（10μM）可以有效抑制两者在破骨细胞伪足小带的共定位情况;骨吸收实验结果表明王不留行黄酮苷（0,10和20μM）呈浓度依赖性抑制破骨细胞骨吸收面积;q RT-PCR检测显示:与对照组相比,王不留行黄酮苷抑制破骨细胞相关基因Acp5、Atp6v0d2、Ctsk和Mmp9的表达,且呈浓度依赖性。在ROS研究方面,王不留行黄酮苷能够浓度依赖性抑制TRAF-6/Nox1通路减少ROS产生,同时可以有效激活Nrf2/keap1/ARE通路提高抗氧化酶Catalase、Sod2和Ho-1的产生增加ROS的清除能力;荧光素酶报告基因的结果显示王不留行黄酮苷呈浓度依赖性抑制NF-κB和NFAT的转录表达;Western Blot结果显示王不留行黄酮苷能够浓度和时间依赖抑制破骨细胞重要的转录因子NFATc1以及其下游长效蛋白c-fos、IntergrinαV、CTSK和V-ATPase-d2的表达。在分子机制方面,Western Blot结果显示王不留行黄酮苷抑制NF-κB信号通路IκBα的降解和p65磷酸化,抑制MAPK信号通路中JNK,ERK和p38的磷酸化。在动物水平方面,Micro-CT显示王不留行黄酮苷能够有效降低雌激素缺乏引起的腰4椎体和股骨远端松质骨的骨量流失。病理组织切片结果显示王不留行黄酮苷降低了腰4椎体和股骨远端的破骨细胞数量及面积分数。在动物体内的ROS探针检测方面,组织病理学免疫荧光的结果显示王不留行黄酮苷可以有效降低卵巢切除小鼠模型体内的ROS水平。结论:本研究首次证实王不留行黄酮苷可以通过抑制ROS的产生及其下游MAPK,NF-κB通路的激活来减少破骨细胞形成和预防卵巢切除小鼠诱导的骨质疏松。
谭振亚[3]（2020）在《Ptpn11激活突变导致间充质干细胞（MSPCs）的能量代谢重编程》文中研究指明[研究背景]白血病是世界上最常见的肿瘤之一,其发生率死亡率均位居癌症首列。白血病的发生和多种因素有关,例如物理因素,环境因素,遗传因素等等,但目前临床最为常见的是一种或多种细胞的基因突变导致的细胞功能异常,最终导致白血病发生。目前常见的白血病的致癌突变基因有BCR-ABL融合突变,FLT3-ITD融合突变,Notch1突变,JAK2（V617F）突变,IDH1/2突变,DNMTA突变,Ptpn11突变等等。而本课题组着重于Ptpn11功能激活型突变导致的白血病的发生。骨髓增殖性肿瘤（Myeloproliferative neoplasma,MPN）是一类造血干细胞克隆性疾病,是一组起源于一系或多系细胞持续异常增殖为特征的疾病,常见的MPN包括慢性粒细胞性白血病、真性红细胞增多症（polycythel1lia vera,PV）、原发性血小板增多症（essential thmmbocvthemia,ET）、原发性骨髓纤维化以及一些慢性中性粒细胞白血病、慢性嗜酸粒细胞白血病、系统性肥大细胞增多症及其他未分类疾病（骨髓增殖特性的一些骨髓恶性肿瘤,如慢性骨髓系白血病和非典型慢性髓细胞性白血病）[1,2]。患者临床表现为髓外造血（可导致脾肿大）、贫血、白细胞异常增多、骨髓纤维变性等症状,有些可转化为急性白血病。目前针对MPN尚无特异有效的治疗手段,主要为支持疗法,目的是降低过高的白细胞或脾大,但并不能延长患者寿命,也不能有效改善其全身症状。骨髓造血微环境是一种复杂的,可以支持造血生长,调节造血干细胞增殖分化的细胞微环境,又称为造血干细胞龛（HSC niche）,其主要包含支持细胞和支持分子,支持细胞主要有间充质干细胞,内皮细胞,巨核细胞,成骨细胞,血管窦等,而这些支持细胞分泌的支持分子如CXCL12和c-Kit等也可以灵活调节HSC的增殖和分化。有趣的是,除了在HSC中的基因突变会导致白血病外,近年来的研究发现在骨髓微环境细胞,尤其是间充质干细胞的基因突变也会导致白血病的发生,小鼠骨髓间充质干细胞的多种基因突变,例如Notch1,RORγ等突变同样会产生白血病表型[3-7]。临床研究中也常常发现在急性髓系白血病（Acute Myelocytic Leukemia,AML）和骨髓增殖性肿瘤（Myeloproliferative Neoplasms,MPN）病人中有很大概率检测出间充质干细胞的基因突变,这与病人的不良预后成正相关[8]。Ptpn11是第一个被发现的非受体酪氨酸磷酸酶激酶,其编码的SHP2蛋白由N-SH2,C-SH2和PTP三个结构域组成。通过N-SH2结构域和PTP结构域的解耦联可以激活下游的磷酸化信号。病理学中,50%以上的努南综合征（Noonan Syndrome,NS）病人中发现有SHP2的激活突变[9,10],这些突变被认为是白血病尤其是青少年粒单细胞白血病（juvenile myelomonocytic leukemia,JMML）,儿童骨髓增殖性肿瘤（juvenile myeloproliferative neoplasm,MPN）的高危因素,同时,因其在不同类型白血病中均存在着SHP2的异常活化和突变而被认为是白血病的原癌基因[11,12],近年认为它还与神经母细胞瘤及多种实体肿瘤有关[12-15]。本课题组早期发现,除了在造血干细胞的Ptpn11突变会导致MPN的发生外,在骨髓的间充质干细胞中Ptpn11激活突变同样会导致MPN的发生。该研究发现其可发生与造血细胞Ptpn11激活突变同样的白血病表型,且发现这一过程是由于突变的MSCs募集单核细胞,单核细胞分泌促炎症因子使得的HSC离巢分化导致MPN的产生[16]。然而,该研究将核心针对向骨髓微环境的一个复合作用,未对MSCs的Ptpn11突变产生的功能改变进行深入的探讨,因此,本课题组将针对Ptpn11突变对MSCs的改变,尤其是代谢中的改变进行深入探讨,运用分子生物学,组织形态学,细胞生物学等方法研究Ptpn11激活突变对骨髓微环境的代谢调控作用并探讨其致骨髓增殖性肿瘤和白血病的分子机制,为血液系统肿瘤的临床治疗提供新的线索。[研究方法]1.配繁基因型为Ptpn11E76K/+;Mx1-Cre的Ptpn11 E76K激活突变小鼠以及Ptpn11+/+;Mx1-cre的对照组小鼠,并通过PIPC诱导Cre酶的表达,诱导Ptpn11E76K在Mx1阳性的骨髓造血干细胞和间充质干细胞中突变。2.将小鼠CO2窒息致死后分离出股骨和胫骨,通过骨髓穿刺冲洗出骨髓细胞,并采用浓度为0.25%的I型胶原酶消化骨组织,通过贴壁培养获得骨髓中的间充质干细胞,用含有10%FBS的DMEM培养。3.将冲洗出的骨髓细胞进行蛋白组学和代谢组学验证。4.对骨头进行冰冻和石蜡切片,通过油红O染色和Masson染色检测骨髓的脂质差异和胶原纤维差异。5.在贴壁细胞培养2-5代后进行细胞实验。采用MTT检测细胞的增殖能力,采用RT-qPCR检测造血支持的趋化因子CXCL12和SCF的表达,采用流式检测细胞的葡萄糖摄取能力和细胞的ROS水平。6.采用Seahorse分析Ptpn11突变组相对于对照组的细胞氧气消耗速率（Oxygen Consumption Rate,OCR）和细胞外酸化率（Extracellular Acidification Rate,ECAR）的改变。7.检测细胞的ATP水平和乳酸水平变化,然后通过RT-qPCR和流式细胞术检测细胞线粒体数量的变化。8.通过Western Blotting检测代谢相关信号通路的变化。9.检测细胞线粒体数量和膜电位变化。10.检测细胞线粒体复合物差异。[实验研究结果]1.待PIPC注射两个月后检测实验组小鼠即表现为明显的骨髓增生性肿瘤（MPN）表型。其脾脏肿大,骨髓原始粒细胞明显增多,红细胞减少。小鼠骨髓细胞Ptpn11 E76K突变的诱导表达达到了97%。2.从骨髓和骨头上分离的间充质干细胞形态良好,活性较强。3.骨髓的油红O染色显示Ptpn11激活突变小鼠的骨髓脂质明显减少,Masson染色显示Ptpn11激活突变组小鼠骨头胶原纤维减少。4.Ptpn11 E76K突变的MSCs增殖能力增强,CXCL12和SCF的m RNA表达水平降低,葡萄糖摄取能力提高,氧化磷酸化副产物ROS增高。5.在有氧氧化中,Ptpn11激活突变小鼠间充质干细胞的基础和最大氧气消耗速率增强,无氧糖酵解中最大细胞外酸化率增强,而基础细胞外酸化率无明显差异。6.Ptpn11激活突变小鼠间充质干细胞的胞内ATP水平升高,而乳酸水平无明显差异,与Seahorse的结果相一致。7.Ptpn11激活突变未对MSCs的线粒体数目产生影响,并且细胞的磷酸化AMPK表达降低,m TOR及其蛋白质磷酸化水平升高。8.Ptpn11E76K/+MSCs的线粒体数量没有明显改变,而细胞的膜电位水平增强了。9.Ptpn11E76K/+MSCs的线粒体电子传递链复合物的活性发生了改变。[结论]Ptpn11激活突变增加了间充质干细胞的有氧氧化水平,这种改变不是通过增加线粒体数目导致的,有可能是通过增加线粒体功能产生的。
郑文亚[4]（2019）在《运输应激对山羊主要器官的应激损伤及热休克蛋白表达的影响》文中提出畜禽运输是畜牧业生产过程中必不可少的一个重要环节,运输过程中的拥挤、颠簸、震动、噪音、温度变化和禁食禁水等复合应激源均可造成动物机体生理紊乱、发病甚至死亡,同时降低肉品质量和动物福利,给畜牧业带来巨大的经济损失。热休克蛋白参与各种生命活动,主要发挥分子伴侣作用,具有组装、折叠和转运等功能,同时参与抗应激和抗凋亡等生理活动,在运输应激中可能发挥一定的作用。本实验选用12只体重相近（13.89±2.96 Kg）且健康的赣西公山羊为实验动物并将其随机分为3组,即对照组（不运输）、2 h运输处理组和6 h运输处理组,运输处理组在温度为28℃32℃、车速为3545 km/h条件下进行公路运输,运用HE染色、透射电镜技术、实时定量PCR、免疫组织化学和Western blot方法,系统分析了不同运输时间山羊心脏、肝脏、肾脏、肺脏、气管、支气管、脾脏、淋巴结和小肠的显微和超微病理变化,并探讨运输前后HSP27、HSP70和HSP90在山羊主要器官的分布和表达情况,为探讨山羊运输应激发病机制及其解决方案的研究提供基础资料。本研究主要取得了以下结果:（1）山羊心脏实验结果表明运输后心肌纤维发生颗粒变性,线粒体肿胀、破裂,间质水肿、充血出血、炎性细胞浸润,6 h运输处理组病变更严重。3种蛋白主要在心肌细胞胞质中表达,HSP27和HSP90在胞核中也表达。与对照组相比,2 h和6 h运输处理组HSP27、HSP70和HSP90的mRNA水平均升高,并且2 h运输处理组HSP27、HSP70和HSP90的蛋白表达量也有所升高,6 h运输处理组仅HSP70和HSP90的蛋白表达量有所升高。（2）山羊肝脏实验结果表明处理组肝脏发生不同程度的损伤,中央静脉扩张充血,窦间隙变小,肝细胞出现明显的颗粒和水泡变性,少量肝细胞核染色质聚集,线粒体肿大变形、嵴断裂消失,胞质中出现空泡和脂滴,6 h运输处理组更为严重。HSP27在中央静脉和门管区附近的肝细胞、血管内皮细胞及胆小管上皮细胞的胞质中都有分布;HSP70与HSP90主要定位于中央静脉和门管区附近的肝细胞胞质中,HSP90在胞核也有表达。与对照组相比,2 h运输处理组仅HSP27和HSP90的mRNA表达量上调,而6 h运输处理组仅HSP70的mRNA表达量上调,同时两个处理组仅HSP27与HSP70的蛋白表达量高于对照组。（3）山羊肾脏实验结果表明部分肾小管和集合小管结构紊乱,管腔界限不清,管腔可见脱落的上皮细胞和黏液,肾小球充血、肿胀,肾小囊腔变窄,线粒体肿胀且嵴断裂并减少,运输6 h后充血、出血更明显,管腔和肾小球细胞损伤更严重。对照组3种蛋白主要在肾小管和集合小管表达,运输后表达更强,处理组肾小体也可见阳性反应。与对照组相比,2 h运输处理组HSP27与HSP90的mRNA和蛋白表达量均有上调,而HSP70的mRNA的表达量下调,其蛋白表达量上调,6 h运输处理组仅HSP27的mRNA表达上调,而3个分子的蛋白表达均上调。（4）山羊肺脏、气管和支气管实验结果表明运输后气管和支气管黏膜水肿、充血,炎性细胞浸润,纤毛倒伏、断裂和脱落,少量黏膜上皮细胞变性、坏死,纤毛和杯状细胞超微病变明显,线粒体肿胀、嵴溶解减少,血管内皮细胞膜起泡、破损。肺泡腔塌陷或融合,肺泡隔增宽、充血,炎性细胞浸润,部分肺泡上皮细胞变性,肺泡腔可见脱落的细胞和碎片,肺泡II型上皮细胞超微病变明显,肺泡I型上皮细胞膜不平整、胞质空泡化,运输6 h后损伤更严重。HSP27和HSP70在气管和支气管上皮、腺上皮和血管内皮表达,处理组阳性表达的炎性细胞数量增多,在肺泡细胞和细支气管上皮普遍表达,HSP90表达强度较弱,仅在气管和支气管上皮、腺上皮及肺泡II型上皮细胞、细支气管上皮表达。气管HSP70蛋白表达量在2 h和6 h运输处理组与对照组相比明显上调,2 h运输处理组肺脏HSP70的mRNA和蛋白表达量与对照组相比均明显上调。（5）山羊淋巴结和脾脏实验结果表明运输后淋巴结和脾脏均出现急性病理变化,淋巴小结和脾小结增生明显,6 h运输处理组淋巴细胞和网状内皮细胞可见核破碎,细胞超微病变明显,发生凋亡或坏死。运输前后3种蛋白在淋巴结和脾脏中的定位存在差异,HSP27主要分布在弥散淋巴组织,HSP70和HSP90主要分布在淋巴小结和脾小结。与对照组相比,2 h运输处理组HSP27、HSP70和HSP90的mRNA水平在淋巴结和脾脏中均上调,而6 h运输处理组仅淋巴结中HSP70的mRNA水平和脾脏中HSP90的mRNA水平有所上调;两个处理组的淋巴结与脾脏HSP90蛋白表达量均有所上调,并且运输2 h后HSP27的蛋白在脾脏、HSP70的蛋白在淋巴结的表达量上调,运输6 h后HSP70在脾脏中的表达量与对照组相比下调。（6）山羊十二指肠、空肠和回肠实验结果表明运输后肠绒毛黏膜上皮和固有层有炎性细胞浸润、充血和出血,少量上皮细胞变性,微绒毛倒伏,核固缩,线粒体肿胀、增生。3种蛋白主要在肠绒毛上皮表达,HSP27和HSP70主要在胞质表达,HSP90在胞质和胞核均有表达。与对照组相比,十二指肠中HSP27和HSP70的mRNA水平在6 h运输处理组中均上调,2 h运输处理组仅HSP27的mRNA水平上调,而在蛋白水平上,仅HSP90的蛋白表达量在运输6 h后上调;空肠HSP27、HSP70和HSP90的mRNA水平在2 h运输处理组均上调,6 h运输处理组中仅HSP70的mRNA水平上调;回肠中仅HSP70的mRNA水平在2 h运输处理组上调,而HSP27的mRNA水平在两个处理组中均下调,HSP27蛋白表达量在两个处理组均明显降低,在运输2 h后HSP70蛋白表达量与对照组和6 h运输处理组相比均有所升高。总之,运输应激对山羊主要实质器官和空腔器官均造成了一定程度的病理性损伤,随着运输时间的延长损伤加重。运输后,HSP27、HSP70和HSP90的定位情况在不同器官中均出现了不同的变化,其mRNA和蛋白的表达量也有一定的变化,提示这些分子与运输应激对山羊脏器的损伤之间存在一定的联系。
李汉骏[5]（2017）在《Foxp1在骨髓间充质干细胞命运决定和衰老过程中的作用研究》文中研究指明骨质疏松是一种在中老年群体中常见的骨骼疾病,患者体内骨质形成与骨质吸收的稳态被打破,骨质吸收快于骨质形成,导致骨量减少、骨骼疼痛、骨折风险加剧。骨质疏松很大程度上与衰老有关,在中国50岁以上中老年人群体中,约20%的人患有骨质疏松;40岁以上人群和60岁以上人群的比较说明:60岁以上老年人中骨质疏松症的发病率明显增高。骨质疏松患者成骨能力明显下降,骨髓常伴有严重的脂肪化,这些表型的出现都与骨髓间充质干细胞的衰老息息相关。骨髓间充质干细胞能够分化成包括成骨细胞、脂肪细胞等在内的骨组织细胞,在骨髓间充质干细胞衰老的过程中,它的分化能力发生改变、更倾向于分化成脂肪细胞而非成骨细胞,自我更新能力逐渐下降,细胞进入静息状态。然而这些衰老现象背后的具体调控机制仍然未得到阐明。在本课题中,我们研究了转录因子Foxp1在骨髓间充质干细胞分化和衰老过程中的功能。我们发现,随着年龄的增长,Foxp1在骨髓间充质干细胞中表达量逐渐降低;与之相反的是,干细胞衰老标志物p16Ink4a表达量逐渐上调。本课题利用Prx1-Cre在骨髓间充质干细胞和前体细胞中敲除了Foxp1,我们发现Prx1-Cre;Foxp1fl/fl小鼠在年轻时就表现出明显的老年性骨质疏松表型——骨量下降、骨髓内脂肪细胞增多,且随着年龄增长表型愈发严重。Prx1-Cre;Foxp1fl/fl敲除鼠的骨髓间充质干细胞增殖速度减慢,自我更新能力下降,更青睐于向脂肪细胞分化而非向成骨细胞分化,出现一系列明显的早衰表型。本课题还使用了Nestin-Cre在Nestin+的骨髓间充质干细胞中敲除Foxp1,我们发现Nestin-Cre;Foxp1fl/fl小鼠骨量也明显下降,骨髓内脂肪细胞增多,骨髓间充质干细胞成脂肪分化增强而成骨分化能力减弱。在原代骨髓间充质干细胞和C3H10T1/2间充质细胞系中过表达Foxp1会抑制它向脂肪细胞分化,促进它向成骨细胞分化。在分子机制层面,我们发现Foxp1能够直接与PPARγ启动子结合,阻遏PPARγ的转录,也能通过与C/EBPβ/δ结合,抑制它们对PPARγ的转录激活作用,从而抑制骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化;Foxp1能够阻遏RBPjk对下游基因的转录激活作用,从而抑制了Notch信号通路活性,促进间充质干细胞向成骨细胞分化。我们还发现,Foxp1可以结合在p16Ink4a的启动子上,直接抑制p16Ink4a的转录。Prx1-Cre;Foxp1fl/fl;p16-/-双敲小鼠可以在一定程度上弥补Prx1-Cre;Foxp1fl/fl小鼠骨量下降的表型。这些实验证明Foxp1在一定程度上通过调控p16Ink4a表达调控了MSC衰老。我们在老年人的骨髓间充质干细胞中过表达FOXP1可以提升它们的增殖能力,也能够提高它们的成骨分化能力,抑制它们成脂肪分化能力。综上所述,我们发现Foxp1以一种年龄和剂量依赖的方式调控了骨髓间充质干细胞的分化和衰老。随着年龄增长,Foxp1表达量逐渐降低,一方面通过调控PPARγ和Notch信号通路的活性,使骨髓间充质干细胞更倾向于向脂肪细胞分化,另一方面通过上调p16Ink4a的表达使骨髓间充质干细胞进入静息状态。这些发现加深了对骨髓间充质干细胞命运决定和衰老调控的认识,同时也为骨质疏松症等骨骼衰老性疾病的治疗提供了崭新思路。
耿朋帅[6]（2016）在《变异黄芪中毒大鼠体内差异蛋白、代谢物及菌群结构的初步研究》文中研究指明疯草（Locoweed）是世界范围内危害草地畜牧业最为严重的有毒植物,在我国广泛分布于西北天然草地,每年可导致大批动物采食后发生中毒死亡,给牧区造成巨大的经济损失,制约了草地畜牧业的可持续发展。变异黄芪是分布较为广泛的疯草类有毒植物之一,其主要有毒成分为生物碱苦马豆素（Swainsonine,SW）。研究表明,SW中毒可以引起动物机体低聚糖蓄积,导致组织细胞发生空泡变性,但目前SW对动物机体代谢性能的影响尚不明确。为探究疯草类有毒植物主要毒性成分—SW对动物肝脏蛋白表达,血液代谢物和粪便菌群结构的影响作用以及变异黄芪中毒病的生物标志物,本试验以SD大鼠为研究对象,用变异黄芪草粉为毒源,进行以下试验:1.变异黄芪致SD大鼠慢性中毒模型的复制60只雌性SD大鼠随机分为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组,每组20只。对照组大鼠饲喂正常全价日粮,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组分别饲喂含10%（SW含量0.0132‰）、30%变异黄芪草粉（SW含量0.0396‰）的混合饲料。饲喂至第120 d,试验Ⅱ组大鼠出现典型的疯草中毒症状,试验Ⅰ组大鼠出现轻微的中毒症状,成功复制出大鼠变异黄芪慢性中毒模型。2.变异黄芪对SD大鼠肝脏蛋白表达的影响攻毒120 d结束后腹腔麻醉大鼠,采集对照组和试验Ⅱ组大鼠肝脏组织,利用iTRAQ技术蛋白组学方法检测肝脏中差异表达蛋白。结果显示,变异黄芪能使SD大鼠肝脏蛋白表达产生差异。试验共鉴定到4280种蛋白,其中显着差异表达蛋白574种,上调蛋白263种,下调蛋白311种。经过筛选得到二肽基肽酶-2、视黄酸可诱导丝氨酸羧肽酶、N-乙酰氨基葡萄糖-6-硫酸酯酶、二肽基肽酶-1、酸性酰胺酶、溶酶体膜糖蛋白-2、组蛋白H2B、钙调热稳定蛋白-1、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、醛糖还原酶相关蛋白、热休克同族71 kDa蛋白等11种潜在蛋白标志物。3.变异黄芪对SD大鼠血浆代谢物的影响攻毒120 d结束后腹腔麻醉大鼠,采集对照组和试验Ⅱ组大鼠血液,离心得血浆,利用UHPLC-Q-TOF MS非靶向代谢组学方法进行血浆代谢物的检测。结果显示,变异黄芪可以引起大鼠血浆中代谢谱发生明显改变,正负离子模式下共检测到47种代谢物发生变化,其中,甘氨胆酸、胆酸、脱氧胞苷、L-谷氨酸、L-抗坏血酸、肉豆蔻酸、棕榈油酸、α-亚麻酸、二十碳五烯酸9种代谢物可以作为变异黄芪中毒动物血液中的潜在生物标志物。4.变异黄芪对SD大鼠粪便微菌群结构的影响攻毒第30、120 d分别采集对照组和试验Ⅱ组大鼠的粪便,利用16S rDNA高通量测序的方法进行粪便微生物菌群结构检测,结果显示,大鼠变异黄芪中毒后粪便的菌群结构发生不同程度的变化,粪便菌群主要分布于普氏菌属（Prevotella）、拟杆菌属（Bacteroides）以及S24-7、Ruminococcacea和Clostridiales。这些菌群的变化显示有益菌含量降低及致病菌含量升高。以上试验结果表明变异黄芪致大鼠中毒主要导致体内糖蛋白、脂质、氨基酸等物质产生异常,进一步引起肝脏、血液以及粪便中代谢物发生改变。
李琳[7]（2016）在《EphB4/ephrinB2通过对骨髓微环境的影响介导慢性髓细胞白血病伊马替尼耐药（IM）的机制研究》文中认为背景与目的慢性髓细胞白血病（CML）是一种起源于造血干细胞的增殖性肿瘤,以具有9号和22号染色体易位所产生的Ph染色体为特征,这种染色体所形成的Bcr-Abl融合基因所编码的蛋白具有异常的酪氨酸激酶活性,进而导致CML发病。甲磺酸伊马替尼（IM）是一种Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制剂目前已成为临床治疗CML的一线用药。伊马替尼的应用尽管能使大部分慢性期CML患者5年生存期明显改善,但仍有一部分患者病情会反复或进展。因此,目前临床上IM耐药已成为治疗过程中最主要的难题。既往对IM耐药的研究机制主要限于对白血病本身的研究,其中最常见的原因是Abl激酶结构域发生的点突变抑制了激酶与IM效应位点的结合。其他的耐药机制主要包括Bcr-Abl基因的序列扩增、Bcr-Abl蛋白产物的过度表达、胞内药物浓度的下降等。随着近年研究,人们发现由于HSC的直接缺陷,或者骨髓内来源的调控信号异常,会造成HSC和niche之间的crosstalk发生改变,这种变化使原本正常的骨髓微环境的失衡,转而成为残留的白血病干细胞（LSC）保护性的异常微环境,我们称其为骨髓微环境介导的耐药,这是白血病残留、复发的主要原因之一,也成为近年来的研究热点。骨髓造血微环境,又称niche,是指适宜骨髓HSC生存的特定微环境,主要包括骨髓基质细胞、细胞外基质（ECM）和多种造血生长因子,三者共同组成了一个高度复杂而有效的调节网络对支持和调节造血干细胞的增殖、分化和成熟发挥重要作用。成骨细胞是骨髓微环境中的重要的基质细胞,它不但维持着HSC的静息状态,同时也对支持和维持造血干细胞的分化和功能。有研究发现,成骨细胞与骨髓HSCs共同移植到异基因小鼠能增加HSCs存活率;而成骨细胞剔除的小鼠其造血功能丧失。在骨髓中成骨细胞来源于间充质干细胞（MSC）。MSC是一种具有多种分化潜能的基质细胞,在骨髓内主要驻留在血管周围[63-64],是成骨祖细胞的主要来源[65]对维护骨组织稳态起到关键性的作用。MSCs在甲状旁腺激素等相关因子的调节下向成骨细胞分化[66-68],并分泌骨桥蛋白,骨钙素等功能性蛋白。迄今为止,我们对MSC如何离开血管周niche迁移至骨表面而最终形成骨的具体机制尚不清楚。Eph是最大的酪氨酸激酶受体蛋白家族。它在调控细胞运动、定位、分选、迁移以及边界的形成的过程中具有重要作用。通过细胞与细胞的接触使膜表面的受体和配体结合,激活受体的前向通路和（或）配体的反向通路从而发挥生物学功能。近年来文献表明,Eph/ephrin多种分子蛋白在骨髓微环境中参与调控造血细胞的迁移,骨稳态的形成。Xing等[71]认为ephrinB1反向通路是骨形成的重要通路,通过实验发现ephrinB1通过激活PDZ功能区介导成骨分化,应用TAZ结合性基序使PDZ去磷酸化会导致核转位,随后激活特异性的成骨转录因子（Osterix）。目前,大量文献研究主要涉及的是Eph/ephrin分子对正常MSC细胞生物学行为的影响。本次研究目的在于研究Eph/ephrin分子在对慢性髓系白血病MSC生物学行为的影响,从而进一步探究其在CML耐药中的作用。本课题组前期实验证实了在慢性髓系白血病难治/复发、急变慢粒的患者细胞株及K562均有EphB4高表达,因此,我们推测白血病细胞通过EphB4膜受体,对骨髓niche中MSC的生物学特性产生影响,从而为整个骨髓微环境的改变打下基础。本课题拟从EphB/ephrinB通路对MSC成骨分化、细胞伸展及迁移等特性的影响为切入点,拟探索EphB在这一现象中的作用及其机制。研究方法1.MSC细胞的分离及培养以密度梯度离心的方法[56]分离人骨髓MSC,用含10%胎牛血清的间充质干细胞完全培养基重悬细胞,接种于培养瓶内,于5%CO2 37℃,恒温培养箱中培养。2.MSC细胞的成骨诱导分化将MSCs细胞用胰酶消化后,以培养基重悬细胞,接种到6孔板中,达到70%-80%融合后,改为成骨诱导培养基,置于5%CO2 37℃恒温培养箱中培养,每2-3天换液,14天后茜素红染色评估钙结节的情况。3、半定量PCR分析用Trizo1方法提取细胞RNA,逆转录为cDNA,扩增、分析。具体方法如全文。4.Western Blot 分析RIPA裂解液提取蛋白,BCA法测定蛋白浓度。采用SDS-PAGE电泳法分离目的蛋白、转印蛋白至PVDF膜。凝胶成像系统扫描,读取各电泳条带。5、Transwell迁移实验将多聚化的EphB-Fc、ephrinB-Fc蛋白加入到Transwell迁移小室的下层小室。以3×104细胞/孔种于Transwell迁移小室的上层小室中,于5%CO2 37℃孵箱中孵育24h。固定,观察外侧细胞,用DAPI染色,计数,实验重复三遍。6.细胞伸展实验将多聚化的EphB-Fc、ephrinB-Fc蛋白工作液加入孔板中,于37℃ 5%CO2孵箱中孵育2h,PBS清洗。以8×103细胞/孔种于细胞板中,于5%CO237℃孵箱中孵育3h。对于抑制实验,细胞先与通路抑制剂室温孵育30min,之后再加入到孔板中,固定,用染色后,于共聚焦显微镜下观察,拍照。7、移植物模型NOG鼠（4-5周龄）分别建立急性髓系白血病模型和皮下移植瘤模型。设计分组 K562-R、K562-R+MSC、K562-R-EphB4-sh、K562-R-EphB4-sh+MSC、MSC和1个空白对照组,于NOG鼠骨髓腔内注射,建立急性白血病模型。同时按上述分组建立皮下移植瘤模型。检测体重,外周血流式检测及皮下结节。待小鼠确认成瘤后,给予Imatinib处理。8.统计学分析数据采用SPSS 20.0软件处理。所有实验重复3次,计量资料用均数土标准差描述。对比2组差异用独立样本t检验,对3组及以上实验组组间比较采用单因素方差分析。在动物实验中,IM未处理及处理组的指标对比,采用配对t检验。P<0.05时,差异具有统计学意义。结果1、CML-CP（CCP）来源的MSCs细胞形态、增殖能力及成骨、成脂分化能力与CML-BC（CBC）来源的MSCs和正常的MSCs有显着差别。2、CCP骨髓来源MSCs细胞ALP、RUNX2mRNA和OCN蛋白质表达较正常人和CBC来源MSCs显着升高。3、CCP 骨髓来源 MSCs 细胞 EphB4 ephrinB2 EphB2 ephrinB1mRNA 为高表达,其蛋白表达水平较正常人和CBC来源MSCs增高。4、EphB4-Fc通过ephrinB 1和或ephrinB2反向通路激活STAT3蛋白促进的CCP来源的MSCs细胞成骨分化。5、EphB4-Fc通过ephrinB2反向通路激活PI3K及JNK蛋白,而不是Src蛋白,介导MSCs细胞的伸展。6、ephrinB2-Fc通过EphB4正向通路激活Src及Abl蛋白,而不是PI3K蛋白介导MSCs细胞的迁移。7、EphB4高表达的K562-R在成骨分化条件下通过直接接触的方式促进CCP-MSCs ALPRUNX2 mRNA表达。8、EphB4-Fc引起的CCP-MSC异常成骨分化促进K562细胞对IM耐药,改变K562细胞周期,降低K562细胞凋亡率。9、以NOD/SCID/yc-/-（NOG）鼠分别通过骨髓腔注射和皮下注射的方式建立急性白血病模型及皮下移植瘤技术成熟、稳定可靠。10、骨髓腔和皮下移植瘤的蛋白表达存在差异。11、骨髓腔小鼠RUNX2和VEGF基因表达均较皮下移植瘤显着增高,组间Runx2表达有显着差异,与MSC及EphB4表达高低密切相关,Runx2高表达对IM显着耐药。12、皮下移植瘤中,VEGF表达与MSC及EphB4表达高低密切相关,高VEGF表达对IM显着耐药。结论1、CML-CP来源的MSCs存在成骨分化功能异常。2、这种异常的成骨分化是白血病细胞与MSC通过EphB4/ephrinB的信号异常激活而引起的。3、异常的成骨分化可进一步促进白血病细胞耐药。
王佳[8]（2015）在《造血干细胞APC/C功能研究及其对再生障碍性贫血的意义》文中认为造血干细胞的细胞周期状态并不一致,大多数造血干细胞处于静息状态从而避免自身衰竭,仅少量干细胞进入细胞周期满足机体需要,因此,细胞周期及其调控是造血干细胞维持其状态和功能所依赖的。有丝分裂后期促进复合物（anaphase promoting complex or cyclosome,APC/C）是调控细胞周期的关键因子,作为E3泛素连接酶,其通过降解特异性底物,调控细胞周期的运行以及执行细胞周期非依赖作用。本课题主要研究APC/C对造血干细胞的作用及其对再生障碍性贫血的意义。在获得Apc2flox/flox和Mx1-Cre转基因小鼠的基础上,本课题成功构建APC/C功能缺失小鼠模型(Apc2flox/floxMx1-Cre转基因小鼠)。此转基因小鼠在APC/C功能缺失后出现骨髓造血细胞锐减,分裂期且停滞于分裂中期的肝细胞增多,并最终因造血功能衰竭和/或肝功能异常死亡。为了避免肝功能异常的干扰,本课题又设计了Apc2flox/floxMx1-Cre/WT骨髓嵌合体小鼠,发现APC/C功能缺失后Apc2flox/floxMx1-Cre外周血细胞数量显着下降,证实APC/C功能缺失原发性导致骨髓造血功能衰竭。本课题进一步分析骨髓造血细胞减少的特征,发现造血细胞从干骺端开始减少,逐渐向骨干段发展,至诱导敲除后第7天几近消失。而诱导敲除后第三天骨髓LSK（Lin-Sca-1+c-Kit+）细胞便已消失,且诱导敲除后的LSK细胞丧失集落形成能力。上述实验结果揭示APC/C是造血干细胞进行细胞周期不可或缺的因素。此外,APC/C功能缺失后仅在骨干中心区域可测得少量c-Kit阳性细胞,而且整个骨髓腔无法测得静止期造血干细胞,结合分裂期肝细胞增多的表象,提示APC/C同时也有助于造血干细胞维持静息状态。APC/C功能缺失后导致造血功能衰竭,提示该复合物与再生障碍性贫血等骨髓衰竭性血液疾病存在某种关联。本课题通过免疫组织化学双染技术,检测再障患者骨髓CD34阳性细胞中APC2蛋白的表达情况,发现绝大多数患者皆不表达APC2蛋白,提示APC/C功能在再障中存在缺失。综上所述,本课题揭示了APC/C是造血干细胞进行细胞周期不可或缺的因素,同时也支持造血干细胞维持静息状态。此外,本课题还发现了APC/C功能在再障造血干细胞中的缺失,为再障的致病机制和治疗方法提供了新的线索。
辛娟[9]（2014）在《力生长因子E肽对体外骨形成与骨吸收的调控机制研究》文中提出胰岛素样生长因子I（IGFI）是含有70个氨基酸的单链多肽，为骨基质中含量最丰富的生长因子，对骨代谢有着重要的调节作用。IGFI的E结构域发生选择性剪接产生3种异构体：IGFIEa，IGFIEb（大鼠）和IGFIEc（人类）。其中IGFIEb和IGFIEc一般在肌肉或成骨细胞受到机械刺激或损伤时才得以表达，因此也称作力生长因子（mechano-growth factor，MGF）。分子结构表征发现MGF羧基端E结构域含有24个氨基酸组成的短肽（也称MGF-Ct24E），正是由于MGF-Ct24E才导致MGF功能上与IGFI和IGFIEa不同。MGF自1996年被Goldspink研究团队发现以来，许多研究证实MGF是一种重要的局部组织修复因子。当机体受到机械刺激或组织受损后，MGF得以表达并诱导体内卫星细胞增殖和分化。MGF-Ct24E与MGF功能相似，也具有诱导成肌细胞增殖和神经保护作用，提示MGF-Ct24E一旦从MGF分离出来，其本身固有的生物活性如组织保护、修复和适应等将得以发挥。我们前期研究发现MGF以自分泌或旁分泌的方式积极响应骨细胞（或组织）损伤修复，在兔骨折模型中MGF-Ct24E通过促进成骨细胞增殖和血管新生加速骨折愈合。基于本课题组对MGF-Ct24E的前期研究成果，本研究试图从细胞水平和分子水平探索MGF-Ct24E对骨形成与骨吸收的影响，以便于寻求确切的靶基因和信息通路，为其将来临床应用于骨修复提供可能。本论文主要研究内容和结果如下：（1）MGF-Ct24E对成骨细胞的功能调控及转录组分析：①通过检测MGF-Ct24E对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、周期、分化及矿化的影响，结果表明MGF-Ct24E促进早期成骨细胞增殖延迟终末分化，促进晚期成骨细胞分化和矿化，最终促进骨形成。②利用基因芯片检测MGF-Ct24E对成骨细胞骨形成过程中基因表达的影响，结果表明MGF-Ct24E能有效调节成骨细胞基因的表达，差异表达基因总共2054个，其中上调1179个，下调基因875个；qPCR检测结果显示，所选择的12个差异表达基因（IL1RN、FIGF、CXCL12、ZW10、NOTHCH2、TWIST2、ALPL、IGFBF5、FGFR2、COMP、COL2A1和IGFI）的差异表达情况与基因芯片实验结果基本一致，验证了基因芯片实验结果的可靠性。③应用GoSurfer软件和在线软件DAVID对MGF-Ct24E调控成骨细胞差异表达的基因进行GO分析，发现富集指数最高的差异表达基因定位于细胞内部、具有酶结合功能、参与细胞周期进程。Pathway分析发现这些差异表达基因主要参与调控粘着斑通路、细胞周期通路、肌动蛋白细胞骨架调控通路、缝隙连接通路、MAPK信号通路、黏着连接通路和胰岛素信号通路等67个信号通路。④对差异表达基因GO生物学过程第38层次的节点和Term进行仔细筛选，总共得到95个成骨细胞相关基因。GO生物学过程分析发现，这些基因主要富集的功能分类包括成细胞周期、骨细胞分化负调控、骨化负调控、软骨骨化、骨化调控、骨发育、骨化、骨矿化、血管生成、成骨细胞分化、骨骼系统发育、细胞正在调控、细胞增殖、创伤反应等。Pathway分析发现它们主要参与调控黏着斑、肌动蛋白细胞骨架调控通路、细胞外基质受体作用通路、细胞因子及其受体的相互作用通路、MAPK信号通路、黏着连接通路、TGF-β信号通路、白细胞跨内皮迁移信号通路和Wnt信号通路等多9个通路。（2）MGF-Ct24E对破骨细胞的功能调控及转录组分析：①通过检测MGF-Ct24E对破骨细胞增殖、周期、分化以及骨吸收功能的影响，结果显示：MGF-Ct24E不仅抑制破骨前体细胞的增殖，还抑制破骨细胞的形成和分化，且具有浓度依赖性；此外，MGF-Ct24E对破骨细胞的骨吸收功能也存在较为显着的抑制作用。②利用基因芯片检测MGF-Ct24E对破骨细胞分化过程中基因表达的调控，结果表明MGF-Ct24E能有效调节破骨细胞基因的表达，差异表达基因总共1712个，其中上调717个，下调895个；qPCR检测结果显示所选择的8差异表达基因（AKT2、SPP1、NF1、ITGB5、NFATc1、TRAF6、MMP9和CTSK）的差异表达情况与基因芯片实验结果基本一致，验证了基因芯片实验结果的可靠性。③应用GoSurfer软件和在线软件DAVID对MGF-Ct24E调控破骨细胞差异表达的基因进行GO分析，结果显示富集指数最高的基因定位于细胞内部、具有核苷酸结合功能、参与细胞周期进程。Pathway分析发现MGF-Ct24E调控的差异表达基因主要涉及细胞周期、DNA复制、错配修复、核苷酸切除修复、同源重组、碱基切除修复、嘧啶代谢、TGF-β信号通路、 p53信号通路、硫酸乙酰肝素生物合成、孕激素介导的卵母细胞成熟、戊糖磷酸途径、谷胱甘肽代谢通路、Wnt信号通路、嘌呤代谢通路、卵母细胞减数分裂、血管内皮生长因子信号通路、肌动蛋白细胞骨架调控和白细胞跨内皮迁移等20个信号通路。④对差异表达基因GO生物学过程第38层次的节点和Term进行仔细筛选，得到79个与破骨细胞密切相关联的差异表达基因，进一步生物学过程GO分析发现，上调基因主要富集的功能包括细胞分化，器官发育，骨骼发育，骨矿化，骨重塑，成骨细胞分化的；下调基因主要富集的功能包括发育过程，多细胞有机体的发育，系统发育、骨化调控、破骨细胞分化和骨骼发育等。Pathway分析显示这79个基因主要参与调控粘着斑、细胞因子及其受体的相互作用、MAPK信号通路、血管内皮生长因子信号通路、肌动蛋白细胞骨架的调控、白细胞跨内皮迁移、趋化因子信号转导通路、紧密连接、TGF-β信号通路和Wnt信号通路等10个信号通路。上述结果提示，MGF-Ct24E通过调控细胞周期进程和调控粘着斑、MAPK信号通路、肌动蛋白细胞骨架调控、TGF-β信号通路、白细胞跨内皮迁移、Wnt信号通路等6条信号通路共同调控体外骨形成和骨吸收。
赵淑娟[10]（2011）在《突变体黑羽鹌鹑的纯化及其MHC class Ⅰ基因多态性与免疫功能关系研究》文中提出本研究系统、详实地阐述了鹌鹑生产中新发现的突变体黑羽鹌鹑的羽色遗传机制、公母鹑基因型的判定及纯化过程。突变黑羽基因h位于常染色体上,黑羽公母鹑的基因型分别确定为hhZYBZYB和hhZYBW;黑羽基因h与栗羽、白羽及黄羽基因的互作关系有别于日本鹌鹑黑羽突变体的羽色遗传,是鹌鹑羽色研究中的新进展;通过纯化、扩繁,培育出了黑羽鹌鹑家系群体,该结果对蛋用鹌鹑新品系的培育及自别雌雄配套系制种具有重要应用价值。通过不同试验对这一突变体的生理生化指标、生长发育规律及生产性能等种质特性进行了系统研究,与其他品系鹌鹑相比突变体黑羽鹌鹑的种质特性没有发生显着变化,为进一步合理开发利用这一突变体的种质资源提供了依据。通过PCR技术首次克隆了突变体黑羽鹌鹑MHC classⅠ基因1367 bp的基因片段,并对其基因结构进行了分析,结果显示该片段上有6个外显子,5个内含子,第4外显子具有较高的多态性。对MHC classⅠ基因第4外显子的296bp片段进行多态性分析显示,该片段上有18个突变位点,计算其杂合度H、多态信息含量PIC可知,这18个位点均为多态基因座,其中6个位点导致了氨基酸的改变。为探讨黑羽鹌鹑MHC与其免疫功能的关系,采用试验鹌鹑感染新城疫病毒F48E9后产生的抗体与第4外显子多态性进行关联分析的方法,寻找到抗病力强的基因型,第2、4、6、13、14、15突变位点各基因型之间抗体水平差异显着或极显着,这些基因可作为抗病力的主要候选基因,为鹌鹑抗病育种提供免疫遗传学基础。
二、Expression of Tissue Transglutaminase in Cultured Bovine Trabecluar Meshwork Cells（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Expression of Tissue Transglutaminase in Cultured Bovine Trabecluar Meshwork Cells（论文提纲范文）
（1）microRNA-200a对慢性高眼压小鼠视网膜的保护作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 青光眼概述 |
| 1.2 青光眼发病机制的研究现状 |
| 1.2.1 RGC在青光眼发病机制中的研究现状 |
| 1.2.2 Müller细胞在青光眼发病机制中的研究现状 |
| 1.2.3 小胶质细胞在青光眼发病机制中的研究现状 |
| 1.3 FGF7概述及研究现状 |
| 1.4 microRNA概述 |
| 1.5 microRNA在神经退行性疾病发病机制中的研究现状 |
| 1.6 microRNA在青光眼发病机制中的研究现状 |
| 1.7 microRNA-200a在神经退行性疾病发病机制中的研究现状 |
| 第2章 microRNA-200a对慢性高眼压小鼠视网膜的作用研究 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 细胞系 |
| 2.1.2 实验动物 |
| 2.1.3 质粒 |
| 2.1.4 主要实验试剂 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 青光眼基因表达芯片的获取及其与正常组的差异分析 |
| 2.2.2 青光眼已知基因的检索及基因间的相互作用分析 |
| 2.2.3 预测调控FGF7的miRNAs |
| 2.2.4 慢性高眼压小鼠模型的建立 |
| 2.2.5 视网膜组织提取 |
| 2.2.6 逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR) |
| 2.2.7 质粒小提 |
| 2.2.8 ARPE-19细胞的培养 |
| 2.2.9 细胞转染 |
| 2.2.10 双荧光素酶基因检测 |
| 2.2.11 动物转染分组 |
| 2.2.12 石蜡切片制备 |
| 2.2.13 苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色 |
| 2.2.14 免疫组织化学 |
| 2.2.15 TUNEL(TdT-mediated d UTP-biotin nick end-labeling)检测 |
| 2.2.16 Müller细胞的培养 |
| 2.2.17 MTT法检测 |
| 2.2.18 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 FGF7参与青光眼的发生发展 |
| 2.3.2 miR-200a在慢性高眼压小鼠视网膜的表达 |
| 2.3.3 FGF7是miR-200a的靶基因 |
| 2.3.4 上调的miR-200a或下调的FGF7可减轻视网膜的结构和形态改变 |
| 2.3.5 上调的miR-200a或下调的FGF7 抑制了CD11b和 iNOS的表达 |
| 2.3.6 上调的miR-200a或下调的FGF7 能抑制RGCs的凋亡 |
| 2.3.7 上调的miR-200a或下调的FGF7 促进Müller细胞的存活 |
| 2.4 讨论 |
| 第3章 microRNA-200a对慢性高眼压小鼠视网膜的保护作用机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要实验试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 慢性高眼压小鼠模型的建立 |
| 3.2.2 动物转染分组 |
| 3.2.3 视网膜组织提取 |
| 3.2.4 逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR) |
| 3.2.5 Western Blot及显色 |
| 3.2.6 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）氧化应激在绝经后骨质疏松中发病机理的作用及王不留行黄酮苷的干预机制研究（论文提纲范文）
| 中英文名词及缩略语表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 基于UPLC-Q-TOF/MS代谢组学技术在绝经后骨质疏松的发病机制中的研究 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料和仪器 |
| 1.2 纳入和排除标准 |
| 1.3 样本的采集和预处理 |
| 1.4 样本检测 |
| 1.5 方法学验证 |
| 1.6 数据预处理 |
| 1.7 数据处理和多元统计分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 纳入研究对象的基线资料 |
| 2.2 绝经后骨质疏松症患者和正常人血浆代谢谱 |
| 2.3 正交投影偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA) |
| 2.4 潜在生物标志物的筛选 |
| 2.5 潜在生物标志物定性分析 |
| 2.6 代谢通路归属和富集分析 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第二部分 炎症介导的氧化应激在绝经后骨质疏松症发病机理中的临床研究 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料和仪器 |
| 1.2 研究对象的纳入和排除标准 |
| 1.3 患者的资料收集 |
| 1.4 炎症指标和抗氧化酶指标的酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 纳入研究对象的流程图 |
| 2.2 纳入研究对象的基线资料 |
| 2.3 骨质疏松的严重程度与血浆中炎症因子和抗氧化酶表达水平密切相关 |
| 2.4 外周血炎症指标随着绝经后骨质疏松程度的加重而升高,而免疫指标则下降 |
| 2.5 影响绝经后骨质疏松症相关指标的单因素和多因素分析 |
| 2.6 影响绝经后骨质疏松症相关指标的ROC诊断性分析 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第三部分 王不留行王酮苷预防绝经后骨质疏松症的网络药理学研究 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 网络药理学的流程图 |
| 1.2 王不留行黄酮苷作用靶点的预测 |
| 1.3 骨质疏松疾病靶点的预测 |
| 1.4 构建蛋白质相互作用网络 |
| 1.5 靶点的GO生物功能及KEGG通路富集分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 王不留行黄酮苷与骨质疏松交集的靶点基因分析 |
| 2.2 蛋白相互作用网络分析 |
| 2.3 GO的生物过程分析 |
| 2.4 潜在靶点KEGG通路富集分析 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第四部分 王不留行黄酮苷通过减少ROS来抑制破骨细胞形成和预防OVX诱导骨质疏松症的研究 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 实验材料和仪器 |
| 1.2 骨髓巨噬细胞的分离和培养 |
| 1.3 破骨细胞浓度依赖分化实验 |
| 1.4 破骨细胞时间依赖分化实验 |
| 1.5 MTT检测BMMs细胞活性 |
| 1.6 破骨细胞泌酸检测 |
| 1.7 细胞免疫荧光 |
| 1.8 骨吸收检测 |
| 1.9 PCR检测 |
| 1.10 荧光素酶报告基因测定 |
| 1.11 蛋白免疫印迹实验 |
| 1.12 体内实验 |
| 2.结果 |
| 2.1 Vac抑制体内RANKL诱导的破骨细胞形成。 |
| 2.2 Vac有效抑制成熟破骨细胞的酸分泌 |
| 2.3 Vac有效抑制组织蛋酶K(CTSK)和F-acting环的共定位 |
| 2.4 Vac有效抑制破骨细胞诱导的骨吸收 |
| 2.5 Vac通过减少ROS产生来抑制破骨细胞的形成 |
| 2.6 Vac抑制ROS产生与下调氧化酶Nox1的表达有关 |
| 2.7 Vac可以激活Keap1/Nrf2/ARE通路诱导抗氧化酶的产生 |
| 2.8 Vac有效抑制破骨细胞转录因子NFATc1入核 |
| 2.9 Vac以时间和浓度依赖性抑制NFATc1及其下游相关蛋白的表达 |
| 2.10 Vac有效抑制NF-κB通路的激活 |
| 2.11 Vac可以以时间依赖的方式有效抑制MAPK通路的激活 |
| 2.12 Vac可以有效抑制C57BL/6小鼠腰椎椎体内破骨细胞的形成和骨质的大量流失 |
| 2.13 Vac减少C57BL/6小鼠股骨远端松质骨骨量的流失 |
| 2.14 Vac抑制C57BL/6小鼠股骨破骨细胞的形成和ROS的产生 |
| 2.15 Vac抑制破骨细胞形成的分子机制图 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 氧化应激介导绝经后骨质疏松症发病机制的研究进展 |
| 1.骨质疏松症的定义和分类 |
| 2.氧化应激在绝经后骨质疏松症发病机理的作用 |
| 2.1 氧化应激的概述 |
| 2.2 氧化应激在绝经后骨质疏松发病机理中作用 |
| 3.抗氧化药物对绝经后骨质疏松症治疗进展 |
| 3.1 化合物对绝经后骨质疏松症的治疗进展 |
| 3.2 中草药对绝经后骨质疏松治疗的进展 |
| 4.展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 在读期间已发表的学术论文 |
（3）Ptpn11激活突变导致间充质干细胞（MSPCs）的能量代谢重编程（论文提纲范文）
| 英文缩略词一览表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 MSCs与白血病的相互调控关系 |
| Reference |
（4）运输应激对山羊主要器官的应激损伤及热休克蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| SUMMARY |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 综述 |
| 1 应激对动物机体的影响 |
| 1.1 应激与心脏 |
| 1.2 应激与肝脏 |
| 1.3 应激与肾脏 |
| 1.4 应激与呼吸系统 |
| 1.5 应激与免疫器官 |
| 1.6 应激与肠道 |
| 1.7 运输应激对动物生理、内分泌指标及肉质的影响 |
| 2 热休克蛋白与动物器官保护 |
| 2.1 热休克蛋白与心脏 |
| 2.2 热休克蛋白与肝脏 |
| 2.3 热休克蛋白与肾脏 |
| 2.4 热休克蛋白与肺脏 |
| 2.5 热休克蛋白与免疫器官 |
| 2.6 热休克蛋白与肠道 |
| 第二章 运输应激对山羊心脏的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要化学试剂 |
| 1.3 实验方案与设计 |
| 1.4 石蜡包埋及HE染色 |
| 1.5 透射电镜技术 |
| 1.6 实时定量PCR |
| 1.7 免疫组织化学 |
| 1.8 Western blot |
| 1.9 统计分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 山羊心脏的显微病理学观察 |
| 2.2 山羊心脏的超微病理学观察 |
| 2.3 山羊心脏三种热休克蛋白的分布与表达情况 |
| 2.4 山羊心脏三种热休克蛋白的定量表达情况 |
| 3 讨论与分析 |
| 4 结论 |
| 第三章 运输应激对山羊肝脏的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 山羊肝脏的显微病理学观察 |
| 2.2 山羊肝脏的超微病理学观察 |
| 2.3 山羊肝脏三种热休克蛋白的分布与表达情况 |
| 2.4 山羊肝脏三种热休克蛋白的定量表达情况 |
| 3 讨论与分析 |
| 4 结论 |
| 第四章 运输应激对山羊肾脏的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 山羊肾脏的病理学观察 |
| 2.2 山羊肾脏三种热休克蛋白的分布与表达情况 |
| 2.3 山羊肾脏三种热休克蛋白的定量表达情况 |
| 3 讨论与分析 |
| 4 结论 |
| 第五章 运输应激对山羊肺脏、气管和支气管的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 山羊气管的病理学观察 |
| 2.2 山羊支气管的病理学观察 |
| 2.3 山羊肺脏的病理学观察 |
| 2.4 山羊气管和支气管三种热休克蛋白的分布与表达情况 |
| 2.5 山羊肺脏三种热休克蛋白的分布与表达情况 |
| 2.6 山羊气管、支气管和肺脏三种热休克蛋白的定量表达情况 |
| 3 讨论与分析 |
| 4 结论 |
| 第六章 运输应激对山羊免疫器官的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 山羊淋巴结和脾脏的病理学观察 |
| 2.2 山羊淋巴结和脾脏三种热休克蛋白的分布与表达情况 |
| 2.3 山羊淋巴结和脾脏三种热休克蛋白的定量表达情况 |
| 3 讨论与分析 |
| 4 结论 |
| 第七章 运输应激对山羊小肠的病理损伤及HSP27、HSP70和HSP90 表达的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 山羊小肠的显微病理学观察 |
| 2.2 山羊小肠的超微病理学观察 |
| 2.3 山羊小肠三种热休克蛋白的分布与表达情况 |
| 2.4 山羊小肠三种热休克蛋白的定量表达情况 |
| 3 讨论与分析 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 导师简介 |
（5）Foxp1在骨髓间充质干细胞命运决定和衰老过程中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 1 引言 |
| 1.1 间充质干细胞 |
| 1.1.1 间充质干细胞的定义 |
| 1.1.2 间充质干细胞的鉴定原则和方法 |
| 1.1.2.1 克隆形成实验（CFU-F assay） |
| 1.1.2.2 分化能力检测 |
| 1.1.2.3 自我更新能力检测 |
| 1.1.3 间充质干细胞的标志物（marker） |
| 1.1.3.1 CD105 |
| 1.1.3.2 PαS |
| 1.1.3.3 Nestin |
| 1.1.3.4 Mx1-Cre |
| 1.1.3.5 Prx1-Cre |
| 1.1.3.6 Leptin Receptor |
| 1.1.3.7 Sox1 |
| 1.2 MSC成骨和成脂肪分化的信号通路和转录调控 |
| 1.2.1 信号通路 |
| 1.2.1.1 Wnt信号通路 |
| 1.2.1.2 Notch信号通路 |
| 1.2.1.3 BMP信号通路 |
| 1.2.2 转录因子 |
| 1.2.2.1 PPARγ |
| 1.2.2.2 C/EBP家族 |
| 1.2.2.3 RUNX2 |
| 1.2.2.4 MSX2 |
| 1.2.2.5 OSTERIX |
| 1.2.2.6 ATF4 |
| 1.2.2.7 TAZ |
| 1.2.2.8 Rb |
| 1.2.2.9 Maf |
| 1.3 间充质干细胞衰老 |
| 1.3.1 衰老的定义 |
| 1.3.2 MSC的衰老表型 |
| 1.3.3 衰老相关的分子机制与信号通路 |
| 1.3.3.1 p16和p53 |
| 1.3.3.2 表观遗传 |
| 1.3.3.3 ROS |
| 1.4 FOXP1的特性、表达谱与功能 |
| 1.4.1 FOX基因家族 |
| 1.4.2 FOXP基因亚家族 |
| 1.4.2.1 FOXP亚家族发现历史 |
| 1.4.2.2 FOXP亚家族的蛋白结构 |
| 1.4.2.3 FOXP家族的DNA结合位点 |
| 1.4.2.4 FOXP1的几种选择性剪接形式 |
| 1.4.3 Foxp1的表达谱与功能 |
| 1.4.3.1 Foxp1在胚胎干细胞中的表达和功能 |
| 1.4.3.2 Foxp1在心脏中的表达和功能 |
| 1.4.3.3 Foxp1在肺和呼吸道中的表达和功能 |
| 1.4.3.4 Foxp1在食管发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.5 Foxp1在B细胞发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.6 Foxp1在T细胞发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.7 Foxp1在单核细胞发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.8 Foxp1在毛囊干细胞和毛发发育过程中的表达和功能 |
| 1.4.3.9 Foxp1在神经系统中的表达和功能 |
| 1.4.3.10 Foxp1在胰岛细胞中的表达和功能 |
| 1.4.3.11 Foxp1在肝脏中的表达和功能 |
| 1.4.4 FOXP1与癌症的关系 |
| 1.4.4.1 FOXP1与弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL） |
| 1.4.4.2 FOXP1与黏膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤 |
| 1.4.4.3 FOXP1与乳腺癌 |
| 1.4.4.4 FOXP1与子宫内膜癌 |
| 1.4.4.5 FOXP1与前列腺癌 |
| 1.4.4.6 FOXP1与肺癌 |
| 1.4.4.7 小结 |
| 1.5 本课题的研究内容、研究目标，以及拟解决的关键科学问题 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.1.1 获得Foxp1基因敲除小鼠 |
| 1.5.1.2 分析Foxp1条件敲除小鼠的表型 |
| 1.5.1.3 运用细胞和分子生物学手段研究Foxp1的调控机制 |
| 1.5.2 研究目标 |
| 1.5.3 拟解决的关键科学问题 |
| 2 实验材料和方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 无机试剂 |
| 2.1.2 有机试剂 |
| 2.1.3 细胞培养用试剂和试剂盒 |
| 2.1.4 酶 |
| 2.1.5 蛋白实验相关试剂 |
| 2.1.6 其他商品化试剂和试剂盒 |
| 2.1.7 重要耗材 |
| 2.1.8 质粒 |
| 2.1.9 引物 |
| 2.1.10 小鼠 |
| 2.1.11 抗体 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 DNA相关实验技术 |
| 2.2.2 RNA相关实验技术 |
| 2.2.3 蛋白质相关实验技术 |
| 2.2.4 细胞相关实验技术 |
| 2.2.5 组织学相关实验技术 |
| 2.2.6 流式细胞术 |
| 2.2.7 染色质免疫共沉淀 |
| 2.2.8 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Foxp1在骨髓间充质干细胞中的表达谱系 |
| 3.2 Foxp1调控骨髓间充质干细胞的分化 |
| 3.2.1 Prx1-Cre; Foxp1~(fl/fl)敲除小鼠出现骨质疏松、骨髓脂肪化表型 |
| 3.2.2 Prx1-Cre; Foxp1~(fl/fl)小鼠骨髓间充质干细胞成脂肪能力增强、成骨能力减弱 |
| 3.2.3 Nestin-Cre; Foxp1~(fl/fl)小鼠成骨不全、骨髓脂肪细胞增多 |
| 3.2.4 Nestin-Cre; Foxp1~(fl/fl)小鼠骨髓间充质干细胞成脂能力增强、成骨能力减弱 |
| 3.2.5 在软骨细胞和成骨细胞中敲除Foxp1并未影响小鼠出生后骨质重塑 |
| 3.2.6 Foxp1缺失不影响骨髓间充质干细胞成软骨分化 |
| 3.2.7 过表达Foxp1抑制C3H10T1/2 细胞和原代骨髓间充质干细胞成脂肪分化、促进成骨分化 |
| 3.2.8 Foxp1调控MSC成脂分化和成骨分化的分子机制 |
| 3.2.8.1 Foxp1抑制MSC成脂肪分化的分子机制 |
| 3.2.8.2 Foxp1促进MSC成骨分化的分子机制 |
| 3.3 Foxp1调控MSC的衰老 |
| 3.3.1 敲除Foxp1后MSC呈现出早衰表型 |
| 3.3.2 Foxp1可能通过抑制p16~(Ink4a)的转录从而调控衰老 |
| 3.3.3 过表达Foxp1可以延缓人类骨髓间充质干细胞的衰老 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Foxp1随着骨髓间充质干细胞衰老表达量降低 |
| 4.2 Foxp1通过抑制PPARγ 转录抑制成脂 |
| 4.3 Foxp1通过抑制Notch信号通路活性促进成骨 |
| 4.4 Foxp1通过调控p16~(Ink4a)调控MSC衰老 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（6）变异黄芪中毒大鼠体内差异蛋白、代谢物及菌群结构的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 文献综述 |
| 第一章 变异黄芪致动物毒性作用及其防控研究进展 |
| 1.1 变异黄芪主要有毒成分研究 |
| 1.1.1 变异黄芪主要有毒成分的确定 |
| 1.1.2 植物中苦马豆素的来源 |
| 1.1.3 苦马豆素的毒性作用 |
| 1.2 变异黄芪致动物毒性作用 |
| 1.2.1 变异黄芪中毒动物的临床症状 |
| 1.2.2 变异黄芪中毒动物组织的病理学变化 |
| 1.3 变异黄芪及动物变异黄芪中毒防控技术 |
| 1.3.1 变异黄芪的物理防控 |
| 1.3.2 变异黄芪的化学防控 |
| 1.3.3 变异黄芪的生物学防控 |
| 1.3.4 变异黄芪中毒的预防与治疗 |
| 1.4 变异黄芪的利用 |
| 1.4.1 变异黄芪的生态学作用 |
| 1.4.2 变异黄芪中苦马豆素的药理活性利用 |
| 1.4.3 变异黄芪的去毒利用 |
| 1.5 展望 |
| 试验研究 |
| 第二章 变异黄芪中毒大鼠肝脏蛋白组学初步研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 植物样品 |
| 2.1.2 试验动物 |
| 2.1.3 动物饲料 |
| 2.1.4 主要仪器和试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 变异黄芪致SD大鼠慢性中毒模型的复制 |
| 2.2.2 肝脏样品的获取及蛋白质样品的制备 |
| 2.2.3 SDS-PAGE电泳 |
| 2.2.4 酶解和肽段定量 |
| 2.2.5 肽段标记 |
| 2.2.6 强阳离子柱（SCX）分级 |
| 2.2.7 质谱分析 |
| 2.2.8 生物信息学分析方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 SDS-PAGE电泳结果 |
| 2.3.2 酶解肽段浓度测定结果 |
| 2.3.3 肽段SCX分级 |
| 2.3.4 蛋白质鉴定结果 |
| 2.3.5 差异蛋白及潜在蛋白标志物的筛选 |
| 2.3.6 显着差异表达蛋白的GO注释分析 |
| 2.3.7 显着差异表达蛋白的KEGG通路分析 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 变异黄芪中毒大鼠血浆代谢组学初步研究 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 植物样品 |
| 3.1.2 试验动物 |
| 3.1.3 动物饲料 |
| 3.1.4 主要仪器和试剂 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 变异黄芪致SD大鼠慢性中毒模型的复制 |
| 3.2.2 血浆样品的获取及预处理 |
| 3.2.3 色谱-质谱分析 |
| 3.2.4 数据处理与分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 试验质量控制 |
| 3.3.2 血浆样本的典型代谢谱图 |
| 3.3.3 数据分析 |
| 3.3.4 血浆差异代谢物及潜在代谢标志物筛选 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 变异黄芪中毒大鼠粪便微生物组学初步研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 植物样品 |
| 4.1.2 试验动物 |
| 4.1.3 动物饲料 |
| 4.1.4 主要仪器和试剂 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 变异黄芪致SD大鼠慢性中毒模型的复制 |
| 4.2.2 粪便样品的采集 |
| 4.2.3 总DNA的提取与质检 |
| 4.2.4 总DNA样品进行 16S rDNA V4区高通量测序 |
| 4.2.5 数据分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 物种丰度统计及群落组成分析 |
| 4.3.2 OTU丰度的Heatmap图 |
| 4.3.3 Alpha多样性分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）EphB4/ephrinB2通过对骨髓微环境的影响介导慢性髓细胞白血病伊马替尼耐药（IM）的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验流程图 |
| 第一章 慢性髓系白血病骨髓原代MSCs的生物学特征及EphB4/ephrinB2的表达 |
| 1. 材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果分析 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第二章 EphB4/ephrinB2通路对慢性髓系白血病MSCs成骨分化、伸展和迁移的影响分析 |
| 1. 材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 结果与分析 |
| 4. 讨论 |
| 5. 小结 |
| 第三章 K562-R对CML-MSCs成骨分化的影响以及MSCs成骨分化对K562细胞耐药、凋亡及周期影响分析 |
| 1. 材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 第四章 骨髓微环境介导髓系白血病耐药的体内实验研究 |
| 1. 研究对象与材料 |
| 2. 实验方法 |
| 3. 实验结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 攻读博士期间的成果 |
| 致谢 |
（8）造血干细胞APC/C功能研究及其对再生障碍性贫血的意义（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 全文缩略语中英文对照 |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 背景介绍 |
| 第二节 研究内容 |
| 第二章 构建APC/C功能缺失小鼠模型 |
| 第一节 材料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第三章 APC/C功能缺失小鼠模型表型分析 |
| 第一节 材料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第四章 APC/C功能对造血干细胞的作用分析 |
| 第一节 材料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第五章 再障患者造血干细胞APC/C功能检测 |
| 第一节 材料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录一 博士期间发表和待发表论文目录 |
（9）力生长因子E肽对体外骨形成与骨吸收的调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要缩略词 |
| 1 绪论 |
| 1.1 问题的提出及研究意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 骨结构、成骨细胞和破骨细胞的生物学特性 |
| 1.2.2 基因芯片技术在骨科研究中的应用 |
| 1.2.3 MGF 及其 E 肽的研究现状 |
| 1.3 本研究的目的和研究内容 |
| 1.3.1 本研究的目的 |
| 1.3.2 本研究的主要内容 |
| 1.3.3 本文的创新点 |
| 2 MGF-Ct24E 对成骨细胞生物活性的影响 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 实验试剂及主要器材设备 |
| 2.2.3 成骨细胞的原代培养、纯化、鉴定 |
| 2.2.4 细胞增殖的测定 |
| 2.2.5 细胞周期的测定 |
| 2.2.6 ALP 的测定 |
| 2.2.7 细胞胶原合成的测定 |
| 2.2.8 细胞矿化的测定 |
| 2.2.9 成骨细胞标志酶 mRNA 表达的测定 |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 2.3 试验结果 |
| 2.3.1 成骨细胞的培养与鉴定结果 |
| 2.3.2 MGF-Ct24E 对成骨细胞增殖与周期的影响 |
| 2.3.3 MGF-Ct24E 对成骨细胞分化、矿化的影响 |
| 2.3.4 MGF-Ct24E 对成骨细胞标志酶 mRNA 表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.4.1 MGF-Ct24E 对成骨细胞增殖与周期的影响 |
| 2.4.2 MGF-Ct24E 对成骨细胞分化与矿化功能的影响 |
| 2.4.3 MGF-Ct24E 对成骨细胞相关基因表达的影响 |
| 2.5 本章小结 |
| 3 MGF-Ct24E 对成骨细胞基因表达谱的影响及生物信息学分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验试剂及主要器材设备 |
| 3.2.2 细胞培养 |
| 3.2.3 基因芯片分析 |
| 3.2.4 qPCR 验证差异表达基因 |
| 3.2.5 基因本体论（Gene Ontology, GO）分析 |
| 3.2.6 差异基因信号通路（Pathway）分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 总 RNA 的提取 |
| 3.3.2 芯片扫描结果 |
| 3.3.3 差异表达基因筛选 |
| 3.3.4 qPCR 验证差异表达基因 |
| 3.3.5 GO 分析结果 |
| 3.3.6 Pathway 分析结果 |
| 3.3.7 MGF-Ct24E 调节骨形成的分子机制探讨 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 MGF-Ct24E 对破骨细胞生物活性及其骨吸收功能的影响 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 实验动物 |
| 4.2.2 实验细胞 |
| 4.2.3 实验试剂及主要器材设备 |
| 4.2.4 体外破骨细胞诱导培养与鉴定 |
| 4.2.5 破骨前体细胞生存率的测定 |
| 4.2.6 破骨前体细胞周期的测定 |
| 4.2.7 破骨细胞形成与分化测定 |
| 4.2.8 破骨细胞骨吸收功能的测定 |
| 4.2.9 破骨细胞标志酶 mRNA 表达的测定 |
| 4.2.10 统计学分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 破骨细胞的形成与鉴定 |
| 4.3.2 MGF-Ct24E 对破骨细胞细胞活性与周期的影响 |
| 4.3.3 MGF-Ct24E 对破骨细胞形成与分化的影响 |
| 4.3.4 MGF-Ct24E 对破骨细胞骨吸收功能的影响 |
| 4.3.5 MGF-Ct24E 对破骨细胞标志酶 mRNA 表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 破骨细胞的诱导与鉴定 |
| 4.4.2 MGF-Ct24E 对破骨细胞分化与骨吸收功能的影响 |
| 4.5 本章小结 |
| 5 MGF-Ct24E 对破骨细胞基因表达谱的影响及生物信息学分析 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验试剂及主要器材设备 |
| 5.2.2 细胞培养 |
| 5.2.3 基因芯片分析 |
| 5.2.4 qPCR 验证差异表达基因 |
| 5.2.5 GO 分析 |
| 5.2.6 Pathway 分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 总 RNA 的提取 |
| 5.3.2 芯片扫描结果 |
| 5.3.3 差异表达基因筛选 |
| 5.3.4 qPCR 验证 |
| 5.3.5 GO 分析结果 |
| 5.3.6 Pathway 分析结果 |
| 5.3.7 MGF-Ct24E 调节骨吸收的分子机制探讨 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 结论与展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A. 作者在攻读博士学位期间科研及发表论文情况 |
| B. 参加的科研项目情况 |
（10）突变体黑羽鹌鹑的纯化及其MHC class Ⅰ基因多态性与免疫功能关系研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 主要组织相容性复合体（MHC）研究进展 |
| 1 主要组织相容性复合体（MHC）的定义与命名 |
| 2 MHCI 类抗原分子结构与遗传特点 |
| 3 MHC 的功能 |
| 第二章 动物抗病育种研究进展 |
| 1 动物机体的抗病机理 |
| 2 动物抗病力的遗传基础 |
| 3 动物抗病育种的方法 |
| 4 家禽MHC 分子多态性与抗病育种 |
| 第三章 鹌鹑羽色遗传研究进展 |
| 1 鹌鹑的起源和种类 |
| 2 鹌鹑的营养、药用及经济价值 |
| 3 鹌鹑羽色遗传的研究 |
| 第二篇 实验部分 |
| 第一章 突变体黑羽鹌鹑的发现及遗传机制研究 |
| 1 突变体黑羽鹌鹑的发现 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二章 突变体黑羽鹌鹑血液生理生化指标的测定与分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 数据处理 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三章 突变体黑羽鹌鹑0-10 周龄生长发育规律研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第四章 突变体黑羽鹌鹑生长曲线的拟合与分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第五章 突变体黑羽鹌鹑生产性能研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第六章 突变体黑羽鹌鹑MHC CLASSⅠ基因克隆及序列分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第七章 突变体黑羽鹌鹑MHC CLASSⅠ基因外显子4 与免疫功能的关联分析 |
| 试验一 突变体黑羽鹌鹑接种新城疫病毒试验 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 试验二 突变体黑羽鹌鹑MHC CLASSⅠ基因第4 外显子多态性研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果与分析 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
四、Expression of Tissue Transglutaminase in Cultured Bovine Trabecluar Meshwork Cells（论文参考文献）
- [1]microRNA-200a对慢性高眼压小鼠视网膜的保护作用及其机制研究[D]. 惠鹏. 吉林大学, 2020(03)
- [2]氧化应激在绝经后骨质疏松中发病机理的作用及王不留行黄酮苷的干预机制研究[D]. 刘云. 广西医科大学, 2020
- [3]Ptpn11激活突变导致间充质干细胞（MSPCs）的能量代谢重编程[D]. 谭振亚. 安徽医科大学, 2020
- [4]运输应激对山羊主要器官的应激损伤及热休克蛋白表达的影响[D]. 郑文亚. 甘肃农业大学, 2019
- [5]Foxp1在骨髓间充质干细胞命运决定和衰老过程中的作用研究[D]. 李汉骏. 上海交通大学, 2017(06)
- [6]变异黄芪中毒大鼠体内差异蛋白、代谢物及菌群结构的初步研究[D]. 耿朋帅. 西北农林科技大学, 2016(11)
- [7]EphB4/ephrinB2通过对骨髓微环境的影响介导慢性髓细胞白血病伊马替尼耐药（IM）的机制研究[D]. 李琳. 南方医科大学, 2016(04)
- [8]造血干细胞APC/C功能研究及其对再生障碍性贫血的意义[D]. 王佳. 上海交通大学, 2015(08)
- [9]力生长因子E肽对体外骨形成与骨吸收的调控机制研究[D]. 辛娟. 重庆大学, 2014(01)
- [10]突变体黑羽鹌鹑的纯化及其MHC class Ⅰ基因多态性与免疫功能关系研究[D]. 赵淑娟. 吉林大学, 2011(05)