导读:本文包含了原核表达纯化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,基因,抗体,夜蛾,肽酶,纤毛,正交。
原核表达纯化论文文献综述
陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰[1]（2019）在《山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化》一文中研究指出山葡萄苯丙胺酸解氨酶(PAL)是苯丙烷途径的关键酶,在果皮着色中能够调控花色苷合成途径。构建PAL基因原核表达重组质粒pET28a-PAL,并对重组蛋白表达条件进行优化,以山葡萄DNA扩增PAL并连接到p MD18-T,筛选得到阳性克隆后连接到pET28a原核表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21后经不同浓度的IPTG、不同诱导温度、不同诱导时间处理,通过DPS设计正交试验优化重组蛋白的表达条件,并将重组蛋白纯化。结果显示,正交试验不同处理下的蛋白表达差异显着(P<0.05),诱导因素的影响程度从强到弱分别为IPTG浓度、温度和时间。IPTG诱导浓度对其影响最显着(P=0.015<0.05),且IPTG浓度为0.6mmol·L-1,诱导温度为22℃,诱导时间为5h时,诱导重组蛋白PAL的效果最佳。成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达,为探究PAL蛋白的表达提供参考。(本文来源于《安徽农业大学学报》期刊2019年05期）
李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜[2]（2019）在《人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用》一文中研究指出目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2019年11期）
李晗,臧佳辰,谭晓怡,夏小雨,王震宇[3]（2019）在《牡蛎重组铁蛋白GF1的原核表达、分离纯化及表征》一文中研究指出铁蛋白可形成纳米笼结构,并可作为功能性纳米材料。在本研究中,从牡蛎的内脏中提取铁蛋白基因GF1,成功克隆后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,纯化和表征。使用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱法分离纯化牡蛎铁蛋白。铁蛋白亚基的分子量为19972 Da(聚丙烯酰胺凝胶电泳),铁蛋白分子量为480 kDa(非变性凝胶电泳)。利用胰蛋白酶进行胶内酶解,使用NanoLC-Q-TOF-MS鉴定铁蛋白,并通过圆二色谱法分析其二级结构,通过动态光散射和透射电子显微镜表征铁蛋白的纳米笼结构。基于人铁蛋白重链氨基酸序列对牡蛎铁蛋白进行同源建模,构建其叁维结构。本研究为铁蛋白自组装和生物功能活性的研究提供了理论基础。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川[4]（2019）在《莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备》一文中研究指出目的为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构建原核表达载体pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,诱导表达得到带有麦芽糖结合蛋白(MBP)和6×His标签的融合蛋白,用纯化后的带有6×His标签的融合蛋白免疫新西兰白兔,经耳源静脉采血,分离得到抗血清,间接ELISA法测得抗血清的效价,Western印迹法和免疫荧光实验对所制备抗体的特异性进行检测。结果成功构建了原核表达质粒pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4。6×His-BBS4和MBP-BBS4融合蛋白的相对分子质量分别为4.5×104和8.5×104,经纯化后得到纯度>85%、浓度>0.5 mg/ml的目的蛋白用于免疫,测定效价为51 200,经Western印迹法对C. reinhardtii CC-125检测有较高的特异性,实现了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备。结论成功制备了莱茵衣藻BBS4的多克隆抗体,为BBS4在纤毛病中作用的深入研究奠定了基础。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2019年06期）
王会征,兰玉彬[5]（2019）在《辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶》一文中研究指出葡聚糖酶抑制蛋白(GIP)是辣椒疫霉菌在病理环境下诱导产生的一类蛋白,是病原菌抗性蛋白的一种。本研究根据辣椒疫霉菌全基因组序列,通过生物信息学分析、序列比对获得葡聚糖酶抑制蛋白全长基因序列。以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组为模板扩增GIP基因cDNA,并对其进行相关生物信息学分析。基因经测序验证后与载体pET28a(+)连接,构建好的重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli Rosetta),用IPTG诱导表达重组蛋白6×His-GIP。重组蛋白在5 mol/L尿素变性环境下进行亲和层析纯化,对纯蛋白进行透析、复性、浓缩后进行分子排阻层析纯化,并对获得的纯蛋白进行蛋白结晶试验,为进一步阐明GIP作用机理奠定基础。(本文来源于《山东农业科学》期刊2019年10期）
杨付来,王月华,赵真真,张兰,张燕宁[6]（2019）在《甜菜夜蛾SeGrx1基因的克隆原核表达纯化及酶动力学研究》一文中研究指出克隆甜菜夜蛾(Spodoptera exigua,H(u|¨)bner)的谷氧还蛋白(glutaredoxin,Grx)基因,构建甜菜夜蛾的谷氧还蛋白原核蛋白表达系统,最终得到高纯度的谷氧还蛋白,并测定SeGrx1的酶动力学参数。RACE技术克隆甜菜夜蛾SeGrx1基因全长,构建pET16b-SeGrx1原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,用镍柱初步纯化裂解菌液上清可溶性蛋白,Tev酶切除融合蛋白的6x His标签,再用Superdex75/200分子筛进一步纯化,目的蛋白的Western-bloting (WB)验证,酶动力学参数测定。SeGrx1基因的GeneBank的注册号MK318813,构建了表达效率很高的pET16b-SeGrx1重组质粒,最佳诱导方式:在细菌生长至OD_(600)=0.6时加入终浓度0.5mM的IPTG,30℃诱导4h;最佳纯化方式为:先用镍柱纯化菌液上清中可溶性蛋白,20mM,50mM咪唑梯度洗脱杂蛋白,300mM咪唑洗脱融合蛋白;最佳酶切融合蛋白的条件为:在含有0.5mM EDTA和1mM DTT的酶切缓冲液中,去除融合蛋白中的高浓度盐和咪唑,在pro:tev=2:5时(质量比)可以得好的酶切效果;再用Superdex 75/200分子筛进一步纯化,可获得纯度在95%以上目的蛋白。WB验证我们所表达的蛋白就是SeGrx1,以谷胱甘肽还原酶作为反应底物测定酶的活性为3.1倍hGrx1活性,酶学动力学参数Vmax=13.87 (±0.083),Km=6.5 (±0.17)×10～(-3)。成功在体外大量表达高纯度高活性的甜菜夜蛾谷氧还蛋白Grx1,并且获得了它的酶学动力学参数,将为进一步挖掘谷氧还蛋白的生物学功能,为探索以谷氧还蛋白作为特异性杀虫剂靶标打下了基础。(本文来源于《中国植物保护学会2019年学术年会论文集》期刊2019-10-23）
张文静,陈海超,郭利建,刘香利,赵惠贤[7]（2019）在《小麦TaWTG1的原核表达、纯化及去泛素化酶活性分析》一文中研究指出去泛素化酶是泛素化途径的逆调节酶,参与调控蛋白质的降解。为了探索小麦(Triticum aestivum)去泛素化酶家族成员WTG1 (wide and thick grain 1)基因的功能,本研究利用生物信息学方法对小麦TaWTG1编码蛋白的理化性质和结构进行了分析;进一步构建其原核表达载体p ET28a-TaWTG1,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)表达菌株BL21(DE3),对重组蛋白His-TaWTG1诱导表达条件(包括培养温度,异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)浓度和诱导时间)进行优化;进一步对重组蛋白进行可溶性分析和镍柱分离纯化,并对其去泛素化活性进行体外验证。结果表明,TaWTG1蛋白由319个氨基酸组成,理论分子量为35.38 kD,等电点为4.62;其叁级结构主要由α螺旋构成,含有OTU (ovarian tumor-related proteases)相关蛋白酶家族的otubain保守结构域;重组蛋白His-TaWTG1的最佳诱导表达条件为0.4 mmol/L IPTG、28℃诱导6 h;该重组蛋白主要以可溶形式存在于上清液中。Western blot分析确定用镍柱分离纯化获得的重组蛋白为目的蛋白;体外活性分析实验表明,TaWTG1具有去泛素化酶活性,可以切割赖氨酸(K)48和K63连接的四聚泛素链。本研究为TaWTG1基因功能研究提供了基础资料。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2019年10期）
袁媛,陈志,罗卫星,蔡惠芬[8]（2019）在《RERG基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备》一文中研究指出目的:为了制备抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG基因(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor)上蛋白的相关测定,填补RERG多克隆抗体的研究空白。方法:试验使用已经在实验室中克隆的RERG基因序列用于原核表达载体,构建原核表达载体pET32a-RERG;随后进行RERG蛋白的原核表达;完成RERG蛋白的纯化以及大白兔RERG多克隆抗体的制备与纯化。结果:通过Western-blot鉴定发现RERG的目的条带单一;使用ELISA检测纯化后的抗体效价,说明其效价达到合格抗体标准。结论:试验制作的RERG抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG蛋白的相关测定,填补了RERG的多克隆抗体的研究空白。(本文来源于《黑龙江医药科学》期刊2019年05期）
刘成倩,李红,高骏,姚惠娟,易建中[9]（2019）在《羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化》一文中研究指出根据Gen Bank上公布的Latexin基因核酸序列设计并合成引物,用RT-PCR方法扩增出Latexin基因,并将其克隆到T载体,转化构建到原核表达载体PET-30a上,得到重组质粒PET-30a-Latexin。将重组质粒转化大肠杆菌transetta(DE3)感受态细胞,并进行IPTG诱导表达、SDS-PAGE电泳和Western-Blot分析。结果表明:所得重组蛋白大小约32 ku,以可溶形式存在,且该蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性反应。(本文来源于《上海农业学报》期刊2019年05期）
杨文静,李玉鹏,梁冬梅,王倩,杨升[10]（2019）在《猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备》一文中研究指出试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列(GenBank登录号:XM_003124236.4)设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,获得重组质粒pET-32a-NLRP6,经抗性筛选阳性菌、双酶切鉴定、PCR及测序分析后,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定。对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析,经变性、镍柱亲和纯化、复性后得到纯化的融合蛋白,将其免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,试验成功克隆大小约为576 bp的NLRP6基因序列,经鉴定重组质粒pET-32a-NLRP6构建正确,通过IPTG诱导获得大小约34 ku的NLRP6重组融合蛋白,Western blotting分析表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。可溶性分析结果显示,NLRP6重组融合蛋白以包涵体形式存在,约占95%。纯化的NLRP6重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,经Western blotting分析显示出特异性反应。本试验成功制备了具有免疫原性的NLRP6蛋白及其鼠源多克隆抗体,为NLRP6蛋白生物学功能及相关疾病致病机制研究提供了基础材料。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年09期）
原核表达纯化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原核表达纯化论文参考文献
[1].陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰.山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化[J].安徽农业大学学报.2019
[2].李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜.人IgEFc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用[J].中国皮肤性病学杂志.2019
[3].李晗,臧佳辰,谭晓怡,夏小雨,王震宇.牡蛎重组铁蛋白GF1的原核表达、分离纯化及表征[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[4].周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川.莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备[J].国际药学研究杂志.2019
[5].王会征,兰玉彬.辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶[J].山东农业科学.2019
[6].杨付来,王月华,赵真真,张兰,张燕宁.甜菜夜蛾SeGrx1基因的克隆原核表达纯化及酶动力学研究[C].中国植物保护学会2019年学术年会论文集.2019
[7].张文静,陈海超,郭利建,刘香利,赵惠贤.小麦TaWTG1的原核表达、纯化及去泛素化酶活性分析[J].农业生物技术学报.2019
[8].袁媛,陈志,罗卫星,蔡惠芬.RERG基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备[J].黑龙江医药科学.2019
[9].刘成倩,李红,高骏,姚惠娟,易建中.羧肽酶A抑制剂Latexin基因的原核表达与纯化[J].上海农业学报.2019
[10].杨文静,李玉鹏,梁冬梅,王倩,杨升.猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J].中国畜牧兽医.2019
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