水痘带状疱疹病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及评价

水痘带状疱疹病毒重组腺病毒载体疫苗的构建及评价

论文摘要

目的构建表达水痘带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV)gE抗原的重组腺病毒载体疫苗,并对其免疫原性进行评价。方法采用AdEasy系统构建携带gE基因的重组腺病毒质粒pAdEasy-gE,PCR及Western blot法鉴定AD293细胞系包装的重组腺病毒rAd-gE,采用阴离子和复合介质Capto Core 700两步法对其进行纯化。以3. 3×106、1×107、3×107ifu剂量的rAd-gE分别单针肌内注射免疫NIH小鼠,检测小鼠血清抗体滴度。结果 PCR及PacⅠ酶切鉴定表明,携带gE基因的pAdEasy-gE构建成功;PCR及Western blot分析显示,AD293细胞系成功包装可表达gE糖蛋白的rAd-gE;经两步法纯化,可回收18. 2%的rAd-gE。1×107和3×107ifu剂量的rAd-gE可引起小鼠的体液免疫响应。结论已成功构建表达高度糖基化gE糖蛋白的rAd-gE,可有效引起小鼠的体液免疫响应,为VZV新型重组腺病毒疫苗的进一步研发奠定基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 质粒、细胞及菌株
  •   1.2 实验动物
  •   1.3 主要试剂及仪器
  •   1.4 引物设计及合成
  •   1.5 重组腺病毒穿梭质粒pS-C-g E的构建及鉴定
  •   1.6 质粒pAdEasy-g E的构建及鉴定
  •   1.7 rAd-g E的包装
  •   1.8 目的糖蛋白rAd-g E表达的鉴定
  •   1.9 rAd-g E的扩增及纯化
  •   1.1 0 小鼠免疫原性检测
  •   1.1 1 小鼠血清抗体水平的检测
  •   1.1 2 统计学分析
  • 2 结果
  •   2.1 质粒pS-C-g E的鉴定
  •   2.2 质粒pAdEasy-g E的鉴定
  •   2.3 rAd-g E的鉴定
  •   2.4 纯化的rAd-g E的鉴定
  •   2.5 rAd-g E的免疫原性
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈伟伟,崔海燕,温晔,彭少丹,朱涛

    关键词: 水痘带状疱疹病毒,抗原,腺病毒,疫苗,系统,免疫原性

    来源: 中国生物制品学杂志 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 天津科技大学生物工程学院,康希诺生物股份公司天津市呼吸道细菌重组及结合疫苗企业重点实验室

    基金: 艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治(2016ZX1000-4001),天津市科技计划项目(16PTWYHZ00070)

    分类号: R392

    DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002429

    页码: 1-6

    总页数: 6

    文件大小: 436K

    下载量: 449

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