论文摘要
以海洋球石藻（Emiliania huxleyi）病毒EhV-99B1基因组为模板,用一对病毒甾醇去饱和酶（sterol desaturase,SD）基因的特异性引物进行PCR扩增,获得EhV-SD基因,将扩增产物克隆至pMD19-T载体后进行测序,并对该基因编码的蛋白质序列进行生物信息学分析。将测序正确的目的基因亚克隆入酿酒酵母表达载体pYES2/CT中,转化酿酒酵母缺陷型菌株YMR015C,并用D-半乳糖诱导表达,提取重组酵母和野生型酵母细胞总脂并进行薄层色谱（thin layer chromatography,TLC）分析。结果显示:EhV-SD基因全长为987 bp,编码328个氨基酸,该蛋白质的理论等电点为8.31,预测的蛋白质分子质量为37.83 ku,为疏水性、不稳定蛋白质,存在6个跨膜结构域,不存在信号肽;其二级结构中,α-螺旋含量最多。氨基酸序列比对结果显示,EhV-SD基因与宿主球石藻及金色藻属（Chrysochromulina sp.CCMP 291）亲缘关系较近。TLC结果表明,EhV-SD基因的表达导致酵母细胞极性较强的脂类明显减少,而极性较弱的脂质成分显著增加,表明EhV-SD具有一定的催化活性。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 王彩凤,刘静雯
关键词: 海洋球石藻病毒,甾醇去饱和酶基因,酿酒酵母,克隆,表达,脂类,薄层色谱
来源: 集美大学学报(自然科学版) 2019年05期
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 集美大学食品与生物工程学院,福建省食品微生物与酶工程重点实验室
基金: 国家自然科学基金项目(41576166),福建省科技计划重点项目(2015Y0039),中国南方海洋研究中心项目(14GZP71NF35)
分类号: Q78
DOI: 10.19715/j.jmuzr.2019.05.03
页码: 335-342
总页数: 8
文件大小: 4127K
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