利用CRISPR/Cas9系统定向编辑甘蓝型油菜BnaLCR78基因

论文摘要

分泌信号肽是生物体内的一类重要功能分子。通过生物信息学分析,揭示甘蓝型油菜BnaLCR78基因编码一个由78个氨基酸组成、N端包含分泌信号肽且C端富含半胱氨酸的蛋白,属于富含半胱氨酸的分泌信号肽。为进一步研究该基因的功能,借助农杆菌介导的甘蓝型油菜下胚轴遗传转化方法,利用CRISPR/Cas9系统对甘蓝型油菜BnaLCR78基因进行编辑,实现定向敲除。本实验共计使用1 200个外植体,经除草剂草铵膦的抗性筛选及对213株抗性苗基因组DNA的PCR检测,获得了26株转基因油菜,转化率约为2.17%,但在T0代并未获得发生了目标基因被编辑的植株。幸运地是从T0自交获得的T1植株中获得基因被编辑了的植株。通过扩增T1代27株转基因油菜靶位点并测序,发现有1株在靶位点2有一个T碱基的插入,其基因型为+1/WT的杂合突变体,说明在T1植株中,基因的编辑效率达到了3.7%。这对后续研究甘蓝型油菜BnaLCR78基因功能的研究提供了帮助。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王金彪,何星辉,高谢旺,覃诗琪,邓淞月,刘春林,阮颖

关键词: 甘蓝型油菜,分泌信号肽,基因,生物信息学,基因编辑

来源: 分子植物育种 2019年20期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农作物

单位: 湖南农业大学生物科学技术学院,湖南农业大学农学院

基金: 国家自然基金面上项目(31571707)资助

分类号: Q943.2;S565.4

DOI: 10.13271/j.mpb.017.006673

页码: 6673-6679

总页数: 7

文件大小: 3965K

下载量: 378

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