一、成骨细胞对血管内皮细胞增殖与形态的影响（论文文献综述）
刘家川[1]（2021）在《锌离子刺激巨噬细胞分泌的外泌体对内皮和成骨细胞功能的影响》文中研究表明新骨和血管生成对于植入体骨整合都至关重要,且二者均受到巨噬细胞的免疫调控。纯锌（Zn）及其合金是一种新型的可降解生物材料,其腐蚀产物Zn离子可调节巨噬细胞的功能。外泌体是细胞内通讯的新型载体,然而巨噬细胞源性外泌体是否参与Zn离子介导的巨噬细胞免疫调节过程仍不明确。本课题首先采用不同浓度的Zn离子刺激巨噬细胞,并通过超速离心法提取相应上清液中的巨噬细胞外泌体。之后利用扫描电子显微镜和蛋白质印迹（Western blot）两种方式对外泌体进行了鉴定。最后将提取的不同组别的外泌体孵育内皮与成骨细胞,评估了Zn离子作用下巨噬细胞源外泌体对两种细胞形态、骨架、黏附能力等,以及对内皮成血管和成骨分化能力的影响。综合本论文工作,所取得的研究结果如下:（1）低浓度的Zn离子对巨噬细胞的增殖有促进作用,但各组间无显着差异。当Zn离子浓度达到500μM及以上时表现出细胞毒性。Zn离子刺激对巨噬细胞形态无显着影响,但会下调巨噬细胞M1和M2表型相关基因的表达。（2）通过SEM形貌观察和蛋白质免疫印迹检测手段确认从Zn离子刺激巨噬细胞所提取的细胞外囊泡为外泌体。外泌体在SEM下呈圆球型,其尺寸主要分布在30～150nm之间。外泌体EDS检测结果显示Zn离子对巨噬细胞外泌体的分泌无显着影响,但会增加外泌体中的Zn含量。（3）巨噬细胞源性外泌体可被内皮细胞摄取。无Zn离子刺激的巨噬细胞分泌的外泌体对抑制内皮细胞的迁移能力无显着性影响,而Zn离子刺激巨噬细胞后分泌的外泌体会促进其成血管能力,对内皮细胞的黏附、NO合成和VEGF的分泌有促进作用,其中Exo-Zn20组效果最为明显。（4）巨噬细胞源性外泌体可被成骨细胞摄取。外泌体可以促进成骨细胞活性,上调碱性磷酸酶的活性,同时对成骨细胞的Ⅰ型胶原分泌有促进作用,其中Exo-Zn4组效果最为明显。本研究表明,Zn离子刺激巨噬细胞分泌的外泌体可促进内皮细胞迁移（血管生成的关键步骤）并上调成骨细胞分化的早期标志物成骨细胞ALP活性,促进Ⅰ型胶原分泌,从而丰富了巨噬细胞的免疫调节机制。
刘鹏[2]（2021）在《含稀土碳酸化羟基磷灰石材料的制备及其应用于骨修复的实验研究》文中研究表明由口腔颌面部肿瘤、创伤、先天性疾病以及炎症导致的骨组织缺损是口腔诊疗中的常见问题,同时也是口腔医生修复骨缺损时所面临的难题之一。颌骨缺损严重影响咀嚼、吞咽、语言等重要生理功能,骨缺损治疗效果不佳或骨缺损修复失败都会直接影响患者的生活质量。口腔种植修复是目前牙列缺失和牙列缺损的主要治疗方式。充足的骨量是保证种植成功的关键之一,但在复杂的咬合关系及不同的口腔环境影响下,牙齿缺失患者往往伴有不同程度的缺牙区牙槽骨萎缩,易引发种植失败的问题。自体骨虽被临床认为是骨移植的“金标准”,但第二术区的开辟造成的创伤较为严重,来源限制,无法随意塑形,且自体骨移植后会发生一定的并发症。异体骨也受限于原料需求和排异反应等造成价格昂贵,并且存在修复风险。“骨组织工程”概念的提出即是针对以上问题,提出的以种子细胞、细胞因子、支架为媒介代替传统的骨移植的治疗方法。利用骨修复材料与种子细胞及细胞因子的相互配合,实现骨缺损的高水平修复是针对较大骨缺损量的骨缺损治疗的必由之路。近年来随着细胞工程和基因编辑技术的发展,组织工程中种子细胞和细胞因子的研究取得了很大进展,骨组织工程里可选用的支架体系种类繁多,但其各自存在的无法避免的问题使得其应用仍然非常受限。例如,金属支架的生物惰性、力学不匹配、高分子材料降解速率可控性差、引发排异反应、传统陶瓷支架的脆性、较差的骨传导性等问题。寻找合适的材料体系,设计并制备出符合不同成骨需求的个性化支架,是骨组织工程在口腔颌骨修复从理念走向临床应用的关键。羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）是骨骼和牙齿组织中天然存在的无机矿物成份,由HA制备成的支架一直被骨组织工程修复领域所推崇。然而,实验室中常用的HA主要是Ca10（PO4）6（OH）2及其它形式的磷酸钙材料,这与骨组织中的HA结晶性差、存在多种离子的梯度取代、在不同骨位置的成份差异等的实际需求相差较大。在文献里已报道的应用中,未掺杂的纯HA存在脆性大、降解效果差、与新生骨组织存在界面等问题,仍然是限制其作为骨组织工程支架的瓶颈之一。如何设计并制备出具有与人体骨组织中的矿物相类似的仿生HA骨粉材料,并且根据不同部位的骨缺损需求,个性化订制骨修复材料,是推动骨组织工程在临床应用的关键。在骨骼和牙齿中的HA主要为存在金属离子梯度掺杂的碳酸根取代的HA,碳酸根的质量分数为3-8wt%,其中碳酸根主要取代磷酸根的晶体学位置,称为B-型羟基磷灰石。碳酸根取代可以使HA结晶度变差,结构更松散,从而有利于破骨和骨重建,其松散的结构更利于与胶原及其它蛋白的结合从而降低材料的脆性,使之具有更强的塑性。因此,开发出碳酸根取代的HA材料,实现碳酸根的浓度可控取代,对于从支架方面推动骨组织工程应用于口腔临床骨缺损治疗具有重要意义。稀土元素由于其特征的光谱性质,可作为生物材料的荧光标记物,尤其是其离子半径与Ca2+离子接近,有很多文献已将其应用于骨植入材料在体内演化情况的荧光标记。另外,也有文献报道低剂量的稀土离子掺杂不但可以调节HA的结晶度,而且还能通过缓释的稀土离子激活钙通道,从而促进间充质细胞向成骨细胞的分化。基于以上关于HA应用于骨组织工程支架的研究现状,我们提出以碳酸根的可控取代和稀土的可控掺杂为源头,制备出系列具有不通碳酸根和稀土离子含量的B-型羟基磷灰石仿生骨粉材料,采用3D打印的方式,将其制备成支架,在细胞和动物水平上评价其促成骨效果,为骨组织工程研究提供更接近于骨组织的可个性化订制的支架体系,从而推动解决口腔颌骨修复所面临的的复杂的成骨环境和特异性成骨需求的问题。本论文主要分为（1）材料设计与可控制备,（2）细胞水平评价小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）的增殖、分化与关键蛋白表达,（3）动物水平评价新生骨组织形成、钙化及新骨在支架中的生长等三个部分,分别简述如下:（1）碳酸化及稀土掺杂的HA仿生骨粉的制备根据在生理环境下的钙离子、磷酸根离子、碳酸根离子的热力学平衡条件,利用Pourbaix计算并得到了B-型羟基磷灰石的矿化条件及调节参数,制备出了系列碳酸根取代的羟基磷灰石（carbonated hydroxyapatite,CHA）纳米材料,通过控制反应条件和初始碳酸根浓度,可调节产物HA中碳酸根的比例。在此基础上,将与Ca2+离子具有相近离子半径但是不同电荷的稀土离子掺杂进入HA及CHA晶格中,从而制备出系列稀土离子掺杂的HA及CHA材料。结构分析表明具有三角形构象的碳酸根阴离子在取代具有四面体构象的磷酸根离子时,以相对于c-轴呈30 o角的方式扭曲叠加在磷酸根四面体的一个较长P-O键参与的面上。随着碳酸化程度的增加,纳米棒的长径比从3.6降为2.9。稀土离子的种类可以影响B-型羟基磷灰石纳米棒的形貌,并且碳酸化并不会影响稀土在HA中的配位环境及发光性质。采用该方法得到的B-型羟基磷灰石材料与人体骨组织中的矿化成份接近,并且稀土元素可以均匀地掺杂在材料的晶格中,既可以利用其特征荧光光谱标记其在体内的变化过程,又可以作为潜在的成骨细胞分化促进剂来激活成骨过程,以实现更好的促成骨效果。（2）细胞实验检测稀土掺杂及碳酸根取代的HA材料的生物学性能选取HA、1mol%铕（europium,Eu）掺杂的HA（Eu-HA）、1mol%铽（terbium,Tb）掺杂的HA（Tb-HA）、碳酸根取代度为3.3wt%的羟基磷灰石（CHA）、1mol%Eu-掺杂的CHA（Eu-CHA）、1mol%Tb-掺杂的CHA（Tb-CHA）六组材料为代表,研究了它们对于MC3T3-E1细胞的形态、增殖及成骨分化的影响。采用三维打印机将以上材料打印成支架,通过系统的细胞增殖、分化及蛋白表达测试,评价其作为骨修复材料应用于骨组织工程的潜力。六组材料都是潜在的骨修复材料,其中Tb的掺入可促进MC3T3-E1细胞的黏附增殖,尤其是Tb-CHA,在ALP染色和定量、茜素红染色、成骨相关蛋白表达实验结果中,表现出了最佳的促成骨效果,明显优于Tb-HA、HA和CHA;Eu的掺入减缓了MC3T3-E1细胞的增殖、黏附及成骨分化。（3）稀土掺杂及碳酸根取代的HA支架促大鼠颅骨缺损修复的实验研究通过以上研究,我们发现在体外促进成骨细胞增殖、黏附和成骨分化方面,掺杂Tb的材料优于掺杂Eu的材料,CHA优于HA,故我们采用大鼠颅骨缺损模型,分别植入HA支架、Tb-HA支架、CHA支架和Tb-CHA支架材料,评价骨缺损的修复。经影像学及HE染色分析结果可知,术后4周,各组对骨缺损的修复均不明显。术后8周,空白对照组缺损处仅表现为少量的新骨形成,HA组未见明显愈合,Tb-HA可见缺损部位实现了一部分修复,HE染色切片可见新生骨;与HA组相比,CHA组对骨缺损进行了一定程度的修复;Tb-CHA组显示出最强的成骨效果,且可降低局部炎症反应。综上所述,本论文从应用于骨组织工程修复骨缺损支架的源头出发,通过对HA材料矿化机制的深入分析,设计并制备出了系列与人体骨组织成份最为接近的CHA材料,并且将稀土离子选择性地标记在HA结构的Ca1晶体学位置;采用3D打印技术,将模型材料打印成支架,分别在细胞水平上和动物水平上,通过系列实验手段检测了材料对MC3T3-E1细胞的增殖、分化能力、蛋白表达水平和新骨生长情况的影响,发现了碳酸根取代和稀土Tb3+离子掺杂都可促进HA材料的骨缺损修复效果。本论文的研究将从源头上把以HA为主的骨组织工程支架材料引导为碳酸根取代的HA和异价金属离子掺杂HA,利用这种碳酸根和稀土离子调控的成骨性能差异,借助3D打印设备,根据不同位置的成骨需要个性化的设计支架,订制具有不同成骨需求的支架材料,从而为像口腔颌面部骨组织这种复杂的骨缺损疾病提供个性化的修复植入材料。
邹丹丹[3]（2021）在《硝酸镧对骨骼重建过程中骨形成和血管生成的影响》文中认为目的:选取镧离子化合物-硝酸镧为研究对象,研究其对骨骼重塑过程中骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cell,BMMSC）、骨髓源性单核细胞（Bone marrow monocyte,BMM）以及人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）的影响,并分析其作用于骨骼的潜在分子机制,为其应用于临床治疗提供理论基础。方法:（1）实验分组:细胞和动物实验均按照0.0001μmol/L、0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L和1μmol/L硝酸镧处理浓度分为5组实验组,加入等体积生理盐水组为对照组。（2）细胞活性检测:利用CCK-8和Calcein-AM/PI双染法测定不同浓度硝酸镧对ICR小鼠BMMSC和BMM活性影响;利用MTT法测定不同浓度硝酸镧对HUVEC活性影响。（3）建立小鼠BMMSC成骨细胞分化体外培养模型,利用骨架Actin染色、茜素红染色,以及ALP活性染色和q RT-PCR方法检测Bmp2、Runx2以及Alp、Ocn、Opg、Rankl、Vegf等成骨基因的表达情况,测定不同浓度硝酸镧对成骨细胞分化能力影响。（4）建立小鼠BMM破骨细胞分化体外培养模型,利用TRAP染色和骨陷窝实验模型,测定RANKL及M-CSF诱导的破骨细胞骨侵蚀能力。（5）建立体外血管新生模型,利用Matrigel基质胶血管状结构形成实验,测定不同浓度硝酸镧对HUVEC管腔形成能力影响。（6）建立小鼠颅盖骨离体骨质疏松培养模型和Transwell小室内建立体外BMMSC-HUVEC非直接接触式共培养体系模型,通过定量分析骨体积分数、孔隙率及成血管化实验结果,进一步探讨硝酸镧对骨损伤的保护作用。结果:（1）CCK-8、MTT和Calcein-AM/PI双染法结果表明:在培养1 d及3 d后,BMMSC、BMM和HUVEC在不同浓度硝酸镧中的增殖未见明显抑制,且结果无统计学意义（P>0.05）,提示预设浓度梯度的硝酸镧对细胞无毒性作用。（2）BMMSC在不同浓度硝酸镧干预7 d,ALP染色及定量分析结果发现,0.01μmol/L硝酸镧可促进MSC早期分化。细胞骨架Actin染色结果提示,与对照组相比,0.0001和0.01μmol/L硝酸镧处理组中细胞发生明显的迁移并聚集成团,且细胞铺展面积也相对增大。BMMSC在不同浓度硝酸镧干预21 d,茜素红染色及定量分析结果显示,1μmol/L硝酸镧处理组矿化结节率与对照组相比有统计学意义（P<0.05）,其余各组未见统计学差异（P>0.05）,提示1μmol/L硝酸镧处理对BMMSC的晚期矿化有一定促进作用。（3）不同浓度硝酸镧处理的BMMSC常规培养7 d,通过对成骨细胞相关基因进行q RT-PCR检测结果分析发现,硝酸镧处理组能够促进Bmp2及其下游Runx2、Ocn、Alp表达,上调Opg水平,且抑制Rankl表达,然而对Vegf并无显着影响。（4）通过TRAP活性检测及定量分析结果探讨硝酸镧对BMM影响发现,培养基中添加RANKL及M-CSF能够有效诱导BMM分化为成熟多核破骨细胞,其中0.01和1μmol/L硝酸镧可明显抑制破骨样细胞形成及骨吸收能力;进一步的小鼠颅骨离体培养模型发现,应用上述浓度硝酸镧培养14 d后,小鼠颅骨孔隙率及骨体积分数得到显着改善（P<0.05）。（5）通过建立体外血管新生模型,评价0.0001、0.01、1μmol/L硝酸镧对细胞管腔样结构形成的影响发现,各处理组明显促进了HUVEC成管的管区面积和分支数,血管长度也有所增加,该结果在BMMSC-HUVEC共培养体系中亦得到验证,提示硝酸镧可能通过作用于BMMSC促进HUVEC成血管化。结论:本研究主要有以下发现:（1）0.0001-1μmol/L浓度范围内的硝酸镧对骨代谢相关细胞无明显毒性作用;（2）硝酸镧可在一定程度上促进BMMSC分化成熟;（3）0.01和1μmol/L浓度的硝酸镧可通过上调OPG/RANKL比值来抑制破骨细胞骨吸收活性;（4）0.0001、0.01、1μmol/L浓度的硝酸镧对内皮细胞的成血管化有一定的促进作用。（5）硝酸镧可促进成骨-破骨细胞共培养体系骨修复,以及成骨-血管内皮细胞共培养体系血管新生。综上,镧离子化合物具有促进骨代谢、改善骨形成的有利作用。
郑凡[4]（2021）在《EPC-BMSC共培养复合PDPBB组织工程骨体系移植研究》文中研究表明[研究目的]本研究采用骨髓来源的内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）与骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）构建干细胞共培养体系,探究EPC-BMSC共培养体系中细胞间的相互调控机制,并联合部分脱蛋白生物骨（Partially deproteinized biologic bone,PDPBB）构建组织工程骨体系,对其联合移植促进骨缺损的修复进行研究;同时研究FoxO1基因对于EPCs促进BMSCs归巢的调控机制。[方法]（1）颈椎脱臼法处死SD大鼠,取双侧股骨及胫骨通过贴壁法分别分离培养骨髓来源EPCs与BMSCs,并通过小管形成实验、免疫双标染色及CD31免疫荧光染色鉴定EPCs,通过诱导BMSCs成骨、成脂及成软骨分化并利用不同的分化染色试剂盒鉴定BMSCs;（2）通过将分离培养的EPCs和BMSCs联合培养,按EPC/BMSC为单纯EPCs、2:1、1:1、1:2以及单纯BMSCs进行联合培养,通过观察细胞形态及细胞增殖实验确定联合培养的细胞比例;（3）利用Transwell小室构建EPC-BMSC共培养模型,提取细胞总RNA后通过转录组测序分析共培养组与单独培养组细胞间的差异基因;（4）通过小管形成实验研究EPC-BMSC共培养体系中BMSCs对EPCs成管能力的影响;通过qPCR验证EPC-BMSC共培养体系中BMSCs的IL15RA基因表达,并同时检测骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）和骨钙素（Osteopontin,OC）在共培养体系条件下BMSCs中的表达,研究EPCs对于BMSCs成骨能力的影响;（5）取市售猪脊柱松质骨通过表面脱蛋白处理后制备PDPB以及PDPBB,比较PDPB、PDPBB以及脱钙骨基质三种支架材料在压缩实验下的最大应力和弹性模量,利用扫描电子显微镜观察材料表面微观结构;（6）将EPC-BMSC共培养体系分别接种在PDPB、PDPBB以及脱钙骨基质上,通过细胞增殖实验和扫描电子显微镜评估三种支架材料的生物相容性;将单独培养EPCs、BMSCs以及EPC-BMSC共培养体系分别接种在PDPBB支架上,通过细胞增殖实验和扫描电子显微镜评估细胞生长情况及细胞在支架表面的粘附情况;（7）通过RNAi技术敲低骨髓来源EPCs的FoxO1基因表达,并通过qPCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测FoxO1基因表达,在培养出稳定敲低FoxO1基因的EPCs后,通过qPCR检测FoxO1基因敲低后SDF-1基因在EPCs中的表达,确定两者之间的关系;（8）利用Transwell小室研究稳定敲低FoxO1基因的EPCs对于BMSCs的趋化作用,同时利用qPCR检测趋化模型中下室EPCs在mRNA水平上SDF-1基因的表达与对照组的差异。[结果]（1）成功通过贴壁法分离培养骨髓来源的EPCs和BMSCs,骨髓来源EPCs免疫双标染色及CD31免疫荧光染色阳性,并具备成管能力;成功诱导BMSCs分化为成骨细胞、脂肪细胞以及成软骨细胞;（2）EPCs与BMSCs在不同比例下联合培养,通过细胞增殖实验发现EPC/BMSC的比例为2:1时,细胞能够维持较高的增殖速率,并在第72h时细胞增殖活性最高,确定EPC/BMSC的最佳比例为2:1;（3）转录组测序结果提示EPC-BMSC共培养体系中BMSCs相比对照组的BMSCs在转录水平上有差异基因共3个,其中表达上调2个,下调1个;共培养组EPCs相比对照组EPCs转录水平上有差异基因11个,其中表达上调8个,下调3个,其中共培养组中BMSCs上调的差异基因IL15RA可能与BMSCs的成骨和骨矿化有关;（4）共培养体系中EPCs在成管早期（2小时）形成小管的管长和分支节点的数量与对照组相比无统计学差异;共培养体系中BMSCs与对照组相比上调IL15RA基因和OPN基因的表达,而两组BMSCs中OC基因的表达无统计学差异;（5）基于压缩实验的结果显示,PDPBB与PDPB的最大应力差异无统计学意义,而脱钙骨基质的最大应力小于PDPB与PDPBB,差异具有统计学意义,通过扫描电子显微镜观察发现PDPBB表面附着丝状纤连蛋白;（6）EPC-BMSC共培养体系在脱钙骨基质上的细胞增殖活性最高,其次为PDPBB支架,而EPC-BMSC共培养体系在PDPB支架上的细胞增殖活性最低,差异具有统计学意义;通过扫描电子显微镜观察发现EPC-BMSC共培养体系在脱钙骨基质和PDPBB表面生长情况最佳,而EPC-BMSC共培养体系的细胞在PDPB表面的形态较为混乱;EPC-BMSC共培养体系在脱钙骨基质与PDPBB表面的细胞粘附较好,而PDPB表面的细胞伪足较少;EPC-BMSC共培养体系在PDPBB表面增殖活性高于EPCs或BMSCs单独培养,差异具有统计学意义,在扫描电子显微镜下观察发现BMSCs有利于EPCs在支架表面的细胞粘附;（7）通过qPCR检测RNAi技术处理后EPCs,发现FoxO1基因表达明显下降,差异具有统计学意义,而SDF-1基因表达与对照组并无统计学差异,说明FoxO1与SDF-1之间无直接关系;（8）Transwell小室模型中,稳定敲低FoxO1基因表达的EPCs组中BMSCs迁移数量与对照组相比无统计学差异,同时Transwell小室模型下室中EPCs通过qPCR检测发现SDF-1基因表达与对照组并无统计学差异。[结论]（1）本实验利用贴壁法从骨髓全细胞中分离出EPCs和BMSCs,且确定EPC-BMSC共培养体系中EPC/BMSC的最佳比例为2:1;EPC-BMSC共培养体系中EPCs促进BMSCs成骨能力可能与IL15RA基因有关,而BMSCs对EPCs的成管能力并无明显影响;通过压缩实验、细胞增殖实验以及扫描电子显微镜观察细胞粘附情况,证实PDPBB是组织工程骨中较为理想的支架材料,EPC-BMSC共培养体系可以增强EPCs在支架表面的粘附作用;（2）FoxO1作为转录因子对于EPCs中SDF-1基因表达无明显作用,同时FoxO1对于EPCs促进BMSCs归巢的无直接调控关系。
姜任东[5]（2021）在《基于YAP/NF-κB信号通路探究TANIIA在骨关节炎中的作用及机制》文中研究指明目的:基于YAP/NF-κB信号通路探究TANIIA在骨关节炎中的作用及机制。（1）通过生物信息学分析构建TANIIA治疗骨关节炎的理论基础,并通过骨关节炎样本验证。（2）通过体外实验,探究TANIIA对骨关节炎样软骨细胞分解代谢、炎性反应、凋亡及YAP/NF-κB信号通路的影响。（3）通过体内实验,探究TANIIA对骨关节炎小鼠软骨分解合成、炎性反应、凋亡的影响以及YAP在退变软骨中的作用。（4）通过体内实验,探究TANIIA对骨关节炎小鼠软骨下骨骨重塑及异常血管形成的影响及YAP在软骨下骨中的作用。方法:（1）1.通过TCMSP数据库检索TANIIA的作用靶点,并查阅TANIIA相关最新文献补充数据库尚未录入的靶点,通过Uniprot蛋白数据库将蛋白质的靶点信息做标准化处理。2.通过Gene Cards、OMIM以及TTD数据库,挖掘骨关节炎的相关靶点,通过DRUGBANK数据库寻找治疗骨关节炎一线药物的作用靶点作为补充。3.制作TANIIA—骨关节炎靶点韦恩图,获得TANIIA治疗骨关节炎的作用靶点,通过STRING数据库及Cytoscape软件制作PPI蛋白互作网络。4.通过Metascape数据库对TANIIA—骨关节炎靶点进行GO及KEGG分析。5.对不同K-L等级骨关节炎软骨样本进行脱钙、包埋、切片后,进行番红固绿染色及免疫组织化学染色,评估各组软骨退变程度、分解代谢因子表达情况以及YAP与骨关节炎退变程度的关系。（2）1.将ATDC5细胞置于ITS培养基,通过阿利新蓝染色及胶原q RT-PCR检测软骨细胞诱导状态。通过IL-1β的干预构建骨关节炎样软骨细胞。2.通过CCK-8、流式细胞术评估TANIIA对骨关节炎样软骨细胞活性的影响,并确定TANIIA在体外实验中的浓度范围。通过YAP/F-actin荧光双标染色及电镜检测,观察骨关节炎样软骨细胞与正常软骨细胞的形态差异、YAP的表达量及表达位置差异,以及TANIIA对骨关节炎样软骨细胞状态的影响。3.通过q RTPCR及WB检测骨关节炎样软骨细胞中炎性反应、凋亡、YAP/NF-κB信号通路相关因子的表达情况,以及TANIIA对上述指标表达的影响。（3）1.通过离断小鼠前叉韧带的方式,模拟由骨关节炎造成关节面异常应力的环境,构建骨关节炎的体内模型。2.预实验中,通过HE、番红固绿染色初步评估TANIIA对骨关节炎小鼠软骨退变的作用,确定TANIIA在体内实验中的最佳灌胃剂量。3.正式实验中,通过小鼠足印迹实验评估骨关节炎小鼠患肢的功能状态及TANIIA对其影响。通过HE、番红固绿染色,评估骨关节炎小鼠关节表面透明/钙化软骨的变化、蛋白聚糖的丢失情况、软骨表面完整性,以及TANIIA对骨关节炎软骨的保护作用。4.通过免疫组织化学染色,评估分解/合成代谢因子在骨关节炎软骨表面的表达情况以及TANIIA对上述指标表达量的影响。5.通过免疫荧光技术,评估骨关节炎小鼠软骨细胞的凋亡率及由YAP介导的凋亡相关因子表达量,以及TANIIA在体内实验中对YAP、软骨细胞凋亡的影响。（4）1.通过Micro CT的三维重建,初步评估软骨下骨微观结构变化。通过CTan软件,对各组小鼠软骨下骨骨体积分数,软骨下骨骨板厚度,骨小梁因子进行分析,评估TANIIA对软骨下骨微观结构的影响。2.对造模术后0天、30天、60天骨关节炎小鼠软骨下骨中破骨细胞、成骨细胞及YAP进行染色标记,评估骨关节炎小鼠软骨下骨骨代谢的动态变化。3.通过Trap、Osterix对破骨、成骨祖细胞进行标记,评估术后30天TANIIA对其分化、形成的影响。4.通过免疫荧光染色,评估TANIIA对破骨细胞形成相关RANK/RANKL/OPG通路的影响。5.通过Micro CT血管造影及CTan软件,评估骨关节炎条件下软骨下骨血管形成情况。通过CD31/Endomucin免疫双标染色,评估TANIIA对包括H型血管在内软骨下骨总血管形成的影响。6.通过免疫组化染色,评估TANIIA对介导血管形成相关因子VEGF、HIF-1α的影响。结果:（1）1.通过TCMSP数据库得到TANIIA的OD值为48.89%,DL值为0.40,相关作用靶点51个。通过Gene Cards、OMIM、TTD、DRUGBANK、Pharmacgkb数据库及最新文献结果得到3176个骨关节炎相关靶点。制作韦恩图,得到包括YAP、NF-κB因子在内的34个TANIIA—骨关节炎靶点。2.GO分析表明,TANIIA在干预骨关节炎时主要参与的生物学过程包括脂多糖应答、激素应答、衰老、内源性凋亡信号通路、肌肉张力应答及糖皮质激素应答;主要分子功能包括与DNA转录因子、多肽、氨基化合物、泛素蛋白激酶及NF-κb的结合。KEGG分析表明,TANIIA治疗OA的通路主要富集于IL-17、凋亡相关、TNF、破骨细胞分化相关及NF-κb信号通路。3.骨关节炎软骨番红固绿染色结果提示,随着K-L等级的提高,关节表面软骨蛋白聚糖的丢失逐渐增多,软骨厚度逐渐降低。同时,软骨中YAP、COX-2、BAX的表达量逐渐增多。（2）1.通过ITS培养基诱导2周可将ATDC5细胞诱导为COLII高表达的软骨细胞,通过IL-1β的干预可构建骨关节炎样软骨细胞模型。2.CCK-8及流式细胞术结果提示,1.25-5μM的TANIIA对软骨细胞活性基本没有影响,同时能够抑制骨关节炎样软骨细胞的凋亡。细胞荧光结果提示,YAP在骨关节炎样软骨细胞表达增多,在细胞核聚集。伴随软骨细胞向肥大表型转变,2.5μM的TANIIA能够有效抑制YAP在骨关节炎样软骨细胞的表达及核转位,减少肥大软骨细胞的出现。电镜结果提示,骨关节炎样软骨细胞凋亡小体出现明显增多。3.q RT-PCR及WB检测结果表明,TANIIA能够通过抑制YAP/NF-κB（YAP,p-Iκbα,p-p65）信号通路,降低骨关节炎样软骨细胞分解代谢、炎性反应（IL-6,TNF-α,COX-2）及凋亡相关因子（BAX,C-CASP3,C-CASP9）的表达和活化。（3）1.在预实验中,通过HE、番红固绿染色初步评估了TANIIA对骨关节炎小鼠关节软骨的保护作用并确定了最佳给药剂量。2.正式实验中HE染色结果提示,骨关节炎软骨术后30天透明软骨及钙化软骨无明显改变,而术后60天出现透明软骨变薄、钙化软骨增厚同时软骨下骨向软骨基底部侵蚀的现象。番红固绿染色表明,术后30天仅出现少量蛋白聚糖丢失,而术后60天不仅出现蛋白聚糖明显丢失,同时软骨表面完整性被破坏。通过TANIIA的干预能有效抑制软骨表面的退变程度,保护软骨完整结构。3.免疫组化及荧光结果提示,合成代谢因子（Aggrecan、Lubricin）在骨关节炎软骨表达明显降低,YAP及分解代谢因子（COX-2,MMP13）表达明显增高,而TANIIA能够维持软骨表面的分解合成稳态,减少软骨损伤。4.免疫荧光结果提示,骨关节炎小鼠软骨细胞凋亡率明显增高,抗凋亡蛋白Bcl-2水平降低而促凋亡蛋白BAX表达增高。TANIIA能够通过调节凋亡相关蛋白,抑制骨关节炎软骨细胞的凋亡。（4）1.Micro CT数据分析提示,术后30天,骨关节炎小鼠软骨下出现髓腔扩大、骨量丢失的现象,术后60天出现软骨下骨异常的骨量增多、硬化骨形成的现象,TANIIA能够有效维持骨关节炎小鼠软骨下骨微观结构。2.TANIIA能够通过调节YAP及RANK/RANKL/OPG通路,维持软骨下骨中破骨/成骨细胞的正常分化、形成水平。3.Micro CT血管造影结果提示,骨关节炎小鼠软骨下骨中包括H型血管在内的总血管数量、体积较Sham组明显增多。TANIIA能够通过抑制成血管因子VEGF、HIF-1α的表达,减少异常血管的形成。结论:（1）TANIIA通过YAP、NF-κB因子等34个靶点作用于骨关节炎,通过抑制YAP/NF-κB信号通路,降低骨关节炎样软骨细胞分解代谢、炎性反应和凋亡水平。（2）TANIIA通过调节骨关节炎小鼠软骨细胞代谢、凋亡水平,维持关节软骨的正常结构及胶原水平,减轻由异常应力造成的软骨退变,延缓骨关节炎进展。（3）TANIIA通过调节YAP及RANK/RANKL/OPG介导的骨代谢,抑制由应力改变造成的软骨下骨骨囊肿、骨岛形成,维持软骨下骨微观结构。同时,通过抑制VEGF、HIF-1α的表达,减少软骨下骨中H型血管的形成,抑制骨—血管病理偶联机制,进一步稳定软骨下骨微观结构,延缓骨关节炎进展。
王峰,徐佳,孔令驰,康庆林[6]（2020）在《H型内皮细胞在成血管-成骨偶联中的作用》文中提出H型内皮细胞（CD31hiEMCNhi）是一种特殊的血管内皮细胞亚型,主要分布于骨内膜及长骨干骺端。H型内皮细胞通过旁分泌等途径募集、激活骨祖细胞并促进软骨内成骨的进程,从而发挥促成骨功能;破骨细胞群与成骨细胞群等调节H型内皮细胞的生物活动。同时,H型内皮细胞的自我调控也与成血管、成骨过程密切相关。本文拟从H型内皮细胞的特性、细胞因子表达谱及其在成血管-成骨相互调节过程中的中介作用等方面作一综述,为建立基于成血管-成骨偶联的骨再生策略提供参考。
鲁晴[7]（2020）在《成骨细胞源性外泌体miRNA调节血管内皮细胞衰老的分子机制》文中研究说明
王宗江[8]（2020）在《PDGF-BB联合TGF-β1在骨折修复中的表达及其作用机制的研究》文中研究表明前言随着社会经济和交通运输的发展,骨折的发生率逐渐增加。骨骼是人体中的重要器官之一,它拥有着自己的发育过程、新陈代谢、修复和改建。随着骨折患者的增多,出现骨折不愈合的比例也逐渐增加,其主要由创伤、先天性畸形、恶性肿瘤、手术和感染等多种因素引起。影响骨折愈合的因素有很多,例如骨折部位、类型、血液供应以及患者的年龄和健康状况等,骨折对患者的生活和社会具有极大的不利影响。骨折不愈合的有限治疗方法以及其他骨重建技术所具有的局限性是我们增加对骨折愈合研究的两个重要因素。虽然骨骼具有相当大的修复能力,但在当再生条件不利的情况下,例如感染、周围组织血供不足、全身性疾病等时,就需要临床干预来促进骨再生。骨折的修复仍然是骨科临床的一大挑战。目前临床上采用的修复骨损伤的方法主要有自体骨移植,同种异体骨移植,异种骨移植和人工材料的植入等。这些治疗方法在临床应用上具有很大的局限性,包括不能与宿主周围组织融合,可用的供体组织有限,医源性损伤以及术后疼痛等。骨是一种动态且高度血管化的组织,其中血管和骨细胞之间存在紧密的空间和时间关系以确保骨骼完整性。骨折修复涉及多个事件的协调,例如成骨和血管生成。干细胞生物医学研究的最新进展表明,干细胞治疗在组织再生和器官修复方面具有重要的应用前景。干细胞是指能够高度增殖和具有自我更新能力且可以分化为多种细胞的原始细胞。其中成体干细胞能够跨胚层多系统分化。在胚胎形成过程中,中胚层分化为骨、软骨、肌肉、肌腱、髓基质、脂肪等多种间充质组织,而这些前体细胞因具有干细胞的特性而被称为间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）。间充质干细胞在骨折患者中具有缩短愈合时间和治疗骨不连的潜能,因为这些细胞不仅具有多样性,而且能够分化为成骨细胞,还具有免疫调节功能。因此,骨组织再生成功的关键是制备足够的MSCs。MSCs具有自我更新和多能性的主要特征,在再生医学中具有很大的应用潜力,它最初存在于许多出生后的组织中,例如骨髓、脂肪组织、皮肤、脐带和胎盘。从理论上讲,不同来源的MSCs都有可能分化为成骨和软骨细胞谱系。成骨对于骨质的稳态更新和骨折再生愈合也是必不可少的。塑造骨骼结构,确保骨骼的完整性,是一个贯穿一生的动态骨重塑过程,在这个过程当中涉及了多种细胞增殖、分化和细胞外基质的合成与钙化。骨重建依赖于骨吸收和骨形成的精确协调,在这个过程当中祖细胞、间充质干细胞分化成功能性成骨细胞,这些成骨细胞组织细胞外基质骨化形成新骨。基因检测已经发现了一些分子,它们在骨重塑过程中调控这些细胞的谱系,揭示了它们抵消骨骼损失和修复受损骨组织方面的潜力。没有血管系统就没有骨骼。血管生成在骨骼发育和骨折修复过程中起着至关重要的作用。与成骨相结合的血管生成主要发生在血管形成和介导营养物质、氧气、矿物质和代谢废物的运输中,这对于维持适当的骨基质合成和矿化至关重要。在血管生成过程中,内皮细胞被募集并增殖,参与毛细血管的形成。值得注意的是,新形成的血管需要MSCs稳定,MSCs与内皮细胞的相互作用通过分泌血管生成生长因子、细胞因子等信号分子进一步调控血管生成。基于近些年对于体内和体外的研究进展,我们利用骨形成和骨修复模型,为更好的了解血管系统在骨骼发育和骨折修复过程中的补充性质提供了依据。一个活跃的血管网络是组织工程骨存活和与现有宿主组织整合的必要前提。越来越多的证据表明,在各种激素,生长因子和机械应激的影响下,细胞因子通过引导细胞增殖、迁移和分化,促进受损骨组织周围的骨生长和愈合。转化生长因子-β 1（Transforming growth factor-β 1,TGF-β 1）是骨基质中含量丰富的细胞因子,可以被释放以诱导MSCs向成骨细胞迁移和分化以产生骨骼。而血小板衍生生长因子 BB（Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB）也因其在血管生成中的作用而闻名,它被作为间充质来源细胞的一种强有力的促有丝分裂原,PDGF-βB被认为可以激活这些细胞,稳定新形成的血管,协调细胞成分,促进成骨细胞分化。PDGF-BB在血管周细胞-MSC-成骨细胞的多组分级联动力学中具有重要意义,表明PDGF-BB偶联TGF-β 1可以作为成骨因子之间的中心信号。本研究主要是探讨:（1）骨组织损伤后PDGF-BB与TGF-β 1表达变化及其功能;（2）PDGF-BB联合TGF-β 1在间充质干细胞迁移、增殖过程中的表达变化;（3）PDGF-BB联合TGF-β 1在间充质干细胞成骨过程中的表达变化;（4）PDGF-BB 与 MSCs 对血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达变化影响。通过研究PDGF-BB和TGF-β 1两者在联合作用对MSCs迁移、增殖与分化的影响,进一步探讨PDGF-BB联合TGF-β 1在骨折修复过程中所起到的作用。在本研究中,我们选取了6周龄小鼠骨髓,制作骨折模型,分离出骨髓间充质干细胞,通过PDGF-BB与TGF-β 1的干预,来检测这两个因子与骨髓间充质干细胞（MSCs）的迁移增殖和血管内皮细胞以及相关因子表达变化,从而研究PDGF-BB和TGF-β 1在骨修复中的机制。PDGF-BB联合TGF-β 1在骨折修复中的表达及其作用机制的研究目的:骨折的修复目前仍然是临床医生面临的一个巨大的挑战,如何有效的预防、治疗和康复是亟待解决的问题,而组织工程学提供了用于产生新骨的有希望的疗法。骨形成是一种细胞过程,对于整个生命中的骨骼发育非常重要,涉及骨生成与血管生成的耦合。在这里,我们研究了 PDGF-BB和TGF-β 1在骨折修复过程中的表达,并检测这两个因子与骨髓间充质干细胞（MSCs）的迁移、增殖和血管内皮细胞以及相关因子表达变化,为进一步研究二者在骨折修复机制的分子通路提供线索。有助于进一步认识骨折修复的分子机制以及相关因子的作用,为骨折的防治提供新思路。方法:1.通过在动物组织标本中,将第1周、3周、6周、9周时留取的骨折修复组织处理后,应用实时定量PCR技术、Western Blot检测PDGF-BB、TGF-β 1及VEGF的mRNA表达及蛋白表达量,采用Pearson检验对三者进行相关性分析;通过建立种植体移植物模型,在第2周、4周、6周、8周、10周时留取骨组织及种植物标本,测定种植物作用时间,通过AP及Von Kossa染色法检测骨组织中的碱性磷酸酶含量及钙盐含量。2.通过体外培养MSCs细胞及EPCs细胞,应用Transwell实验检测不同条件下,MSCs细胞的迁移能力及增殖;采用ARS染色观察对不同条件下的MSCs细胞的钙质含量;通过实时定量PCR技术检测成骨相关蛋白Runx2、Alkaline phosphase（AP）、Collagen type I alpha 1（Coll α 1）及 Osteocalcin（Ocn）的基因表达水平变化;使用流式细胞技术来检测内皮祖细胞表面标志物;运用ELISA检测不同处理条件下的EPCs细胞上清液中VEGF的表达量,并从分子水平上探讨骨折修复反应发生的机制。结果:1.与正常小鼠骨组织相比,小鼠骨折修复中的PDGF-BB、TGF-β 1及VEGF的mRNA表达及蛋白表达量高于对照组;而在基因表达水平上TGF-β 1分别与PDGF-BB、VEGF呈正相关;通过测定种植体移植物,发现其作用时间大于4周,且碱性磷酸酶含量及钙盐含量高于对照组。2.通过Transwell实验分别发现PDGF-BB、TGF-β 1可显着促进MSCs迁移及增殖,而且我们还发现TGF-β 1比PDGF-BB显示出更大的潜力;ARS染色观察到PDGF-BB处理后的MSCs细胞细胞内钙质丰富,而TGF-β 1处理后的MSCs细胞细胞内钙质减少;通过检测成骨相关蛋白我们发现其在PDGF-BB组表达升高,而在TGF-β 1表达减少,当二者共同作用时,相关蛋白基因表达含量Runx2、AP、Coll a 1表达增加,而Ocn表达减低;PDGF-BB能够诱导EPCs毛细管形成,加入MSCs后,进一步增强EPCs管形成;通过ELISA检测到VEGF在经PDGF-BB和MSCs处理的EPCs中高表达。结论:1.PDGF-BB和TGF-β 1都能够招募MSCs并促进其迁移、增殖,但TGF-β1更为显着;相反,PDGF-BB促进成骨作用,但TGF-β 1抑制成骨作用。2.PDGF-BB和TGF-β1的联合应用可显着诱导体内新骨形成。3.PDGF-BB与MSCs共培养可增强诱导EPCs的血管生成。4.PDGF-BB和TGF-β 1联合应用在骨折愈合修复中起到了重要作用,因此,适当调控MSCs中二者的表达量可能是调节骨折损伤后修复的一条新途径,也成为研究促进骨折后骨修复的一个新靶点。
杨桂然[9]（2020）在《成纤维细胞联合血管内皮细胞促进脂肪干细胞增殖及成骨分化研究》文中提出目的:为进一步优化组织工程骨仿生性能,本研究拟通过将具有优良增殖分化性能、分泌合成胶原能力、含多种调控因子的成纤维细胞（FB）与血管内皮细胞（VECs）联合共培养脂肪间充质干细胞（ADSCs）,探讨FB对ADSCs的作用,明确FB是否能加强VECs的直接诱导作用,为解决组织工程骨形成缓慢、血管化缓慢等问题以及临床骨缺损治疗方案提供捷径和新思路。方法:①将血管内皮细胞、成纤维细胞、脂肪干细胞三种细胞株分别体外培养,并通过细胞形态学及表面标记进行检测和鉴定,确定其各自细胞生物学特性;②将细胞分为四组:ADSCs组、ADSCs+VECs共培养组、ADSCs+FB共培养组、ADSCs+VECs+FB共培养组,分别倒置显微镜下观察细胞的形态变化;③CCK-8法绘制出各组细胞的生长曲线,比较各组细胞增殖情况;④共培养第7、14、21、28天各组进行茜素红染色、ALP染色,分别进行定性及定量检测;⑤共培养第3周行Western blot检测各组BMP-2蛋白水平表达;⑥共培养第3周行RT-PCR检测成骨标志基因（ALP、OCN）mRNA的表达,以评估共培养体系的成骨分化能力。结果:①三种细胞的形态及增殖情况良好,ADSCs的CD90、CD105（+）,成骨诱导（+）;VECs的CD133、vWF（+）;FB的Vinmintin（+）;②ADSCs+VECs+FB共培养组培养至14天时,细胞之间出现许多突触相互连接,部分细胞融合成团块状,呈巢状分布,而ADSCs单独组细胞形态单一,未见细胞团出现;③生长曲线可见各组细胞吸光度逐渐升高,各组生长曲线形态基本相同,ADSCs+VECs+FB共培养组OD值最高;④茜素红染色定量分析第14天时,ADSCs组与ADSCs+VECs组比较、ADSCs+FB组与ADSCs+VECs+FB组比较无明显差异（P>0.05）,第21天时,除ADSCs组与ADSCs+VECs组比较无明显差异外（P>0.05）,其余各时间、各组组间两两比较均有统计学差异（P<0.05）;ALP染色定量分析各时间段组间均有统计学差异（P<0.05）;除第21天时,B组与C组比较无明显差异外（P>0.05）,其余各个时间点、各组组间两两比较均有统计学差异（P<0.05）;⑤Western Blot结果显示四组细胞均有表达,ADSCs+FB组和ADSCs+VECs+FB组的表达较明显,且ADSCs组与ADSCs+VECs组相比无明显差异（P>0.05）,其余各组组间两两比较均有统计学差异（P<0.05）;⑥RT-PCR结果显示对于ALP mRNA的表达,ADSCs组与ADSCs+FB组相比无明显统计学差异外（P>0.05）,其余各组相比均有统计学差异（P<0.05）,对于OCN mRNA的表达,除ADSCs组与ADSCs+VECs组相比无明显统计学差异外（P>0.05）,其余各组相比均有差异（P<0.05）。结论:①在共培养条件下VECs能在体外无其他条件诱导情况下直接促进ADSCs增殖并向成骨细胞分化;②FB和ADSCs体外共培养条件下促进ADSCs成骨分化的能力比VECs强,但促其增殖效果不如VECs;③FB联合VECs与ADSCs共培养既能使ADSCs大量增殖,又能促进其快速而高效向成骨细胞分化。
吴加东[10]（2020）在《雷帕霉素改善铁蓄积高转换骨质疏松中“骨生成/血管形成”的基础研究》文中研究指明第一部分铁蓄积对小鼠、成骨细胞中mTOR水平及小鼠骨量的影响目的:研究铁蓄积—mTOR表达之间的关系,探索mTOR在铁蓄积骨质疏松中可能存在的作用。方法:1、动物实验:制作外源性铁蓄积小鼠模型,将20只8周龄野生（Wt）雄性小鼠（C57/BL6）随机分为两组,分别腹腔注射枸橼酸铁胺（Wt+FAC组,n=10）和生理盐水（Wt+Saline组,n=10）,FAC和Saline使用均为40mg/kg,每周3次,持续两月;制作内源性铁蓄积小鼠模型,将10只8周龄铁调素敲除（△Hep）的转基因雌性小鼠和10只8周龄野生（Wt）雌性小鼠予以卵巢切除（OVX）,分别为△Hep+OVX组、Wt+OVX组,饲养两月。两月后检测上述小鼠的体重并取血清和骨组织标本。血清铁蛋白（Fer）、mTOR浓度采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测。肝脏和股骨行普鲁士蓝（Perls）铁染色,电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES）检测肝铁含量,股骨微型计算机断层扫描（Micro-CT）检测骨量及骨密度（BMD）后用电感耦合等离子体发射质谱仪（ICP-MS）测量骨铁含量。胫骨mTOR基因表达、蛋白表达分别采用定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、免疫印迹实验（Western Blot）检测。2、细胞实验:实验组将h FOB1.19细胞、RAW264.7细胞用含200μM、50μM浓度FAC的培养基进行干预72h（iron组）,对照组用磷酸盐缓冲液（PBS）干预（cont组）。两组细胞培养基中铁离子浓度用ELISA法检测,mTOR基因表达、蛋白表达分别采用RT-PCR、Western Blot检测。结果:1、在体研究:各组小鼠体重无统计学差异（p>0.05）。在外源性FAC干预后,Wt+FAC组较Wt+Saline组,血清Fer浓度、肝铁含量、骨铁含量、肝脏及股骨远端普鲁士蓝铁沉积显着增加（p<0.05）,同时血清mTOR浓度、mTOR在肝脏和胫骨中的基因表达和蛋白表达水平亦显着上升（p<0.05）。在内源性铁调素敲除后,△Hep+OVX组较Wt+OVX组,血清铁蛋白浓度、肝铁含量、骨铁含量、肝脏及股骨远端普鲁士蓝铁沉积显着增加（p<0.05）,同时血清mTOR浓度、mTOR在肝脏和胫骨中的基因表达和蛋白表达水平亦显着上升（p<0.05）,而且骨量、BMD明显减少（p<0.05）。2、离体研究:在外源性FAC干预后,h FOB1.19细胞培养基中铁离子浓度明显增加（p<0.05）,同时mTOR基因表达、蛋白表达均显着上升（p<0.05）。RAW264.7细胞培养基中铁离子浓度较对照组cont组明显增加（p<0.05）,但mTOR基因表达、蛋白表达两组均无显着差异（p>0.05）。结论:mTOR水平伴随铁浓度增加而上升,铁蓄积可能通过增加的mTOR促进OVX小鼠骨量丢失形成“铁蓄积骨质疏松”。第二部分雷帕霉素在铁蓄积高转换骨质疏松中的骨生成作用目的:研究mTOR抑制剂雷帕霉素（Rapa）对铁蓄积高转换骨质疏松中骨生成的影响。方法:1、动物实验:将16只8周龄野生（Wt）雌性小鼠和48只8周龄铁调素敲除（△Hep）的转基因雌性小鼠予以卵巢切除（OVX）,分为四组（Wt+OVX组、△Hep+OVX组、△Hep+OVX+CMC组和△Hep+OVX+Rapa组）。Rapa为腹腔注射,3mg/kg/day,持续两月。CMC为Rapa溶剂,注射剂量及持续时间同Rapa。末次注射结束后四组小鼠处死取血清和骨组织标本。用股骨微型计算机断层扫描（Micro-CT）检测股骨骨量及骨密度（BMD）等参数,扫描电镜（SEM）、H-E染色检测骨量及骨小梁结构,碱性磷酸酶（ALP）染色检测成骨细胞骨形成能力,生物力学实验检测股骨弯曲弹性模量、弯曲能量、最大弯曲应力、弯曲刚性系数,血清成骨指标（ALP、PINP、Ocn）采用ELISA检测,成骨基因（Runx2、SP7、ALP）表达采用RT-PCR检测。2、细胞实验:将h FOB1.19细胞分为四组（cont组、iron组、iron+si-NC组、iron+si-MT组）,cont组作为对照组,iron组用含200μM浓度FAC的培养基进行干预72h,iron+si-MT组和iron+si-NC组为成骨细胞分别行mTOR特异性si RNA转染和空白转染后再用含200μM浓度FAC的培养基进行干预72h。用碱性磷酸酶（ALP）染色检测成骨细胞活性,用茜素红染色（ARS）检测成骨细胞骨矿化能力,成骨基因（Runx2、SP7、ALP）表达采用RT-PCR检测,成骨蛋白（Runx2,Ocn）表达用Western Blot检测。结果:1、在体研究:股骨Micro-CT显示,与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组BMD、BV/TV、TB.N、TB.Th、Conn D明显减少,TB.Sp、SMI明显增加,而△Hep+OVX+Rapa组较△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组BMD、BV/TV、TB.N、TB.Th、Conn D增加,TB.Sp、SMI减少（p<0.05）。股骨电镜、胫骨HE染色显示,与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组骨量及骨小梁明显减少,使用雷帕霉素后骨量及骨小梁明显改善（p<0.05）,胫骨ALP染色亦表明△Hep+OVX组使用雷帕霉素后成骨细胞骨形成明显增加（p<0.05）。生物力学显示,与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组弯曲弹性模量、弯曲能量、最大弯曲应力、弯曲刚性系数明显降低,注射雷帕霉素后明显恢复（p<0.05）。与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组血清成骨指标（ALP、PINP、Ocn）、骨组织成骨基因（Runx2、SP7、ALP）表达明显减少,雷帕霉素干预后明显增加（p<0.05）。2、离体研究:ALP染色和茜素红染色显示,与cont组相比,iron组和iron+si-NC组的成骨细胞活性及矿化能力明显下降,iron+si-MT组较iron组和iron+si-NC组明显改善（p<0.05）。与cont组相比,iron组和iron+si-NC组的成骨基因（Runx2、SP7、ALP）和成骨蛋白（Runx2,Ocn）表达明显降低,iron+si-MT组较iron组和iron+si-NC组明显恢复（p<0.05）。结论:雷帕霉素在铁蓄积高转换骨质疏松中可以提高骨量及成骨活性,具有改善骨生成作用。第三部分雷帕霉素在铁蓄积高转换骨质疏松中的血管形成作用目的:研究mTOR抑制剂雷帕霉素（Rapa）对铁蓄积高转换骨质疏松中血管形成的影响。方法:1、动物实验:利用实验第二部分Wt+OVX组、△Hep+OVX组、△Hep+OVX+CMC组、△Hep+OVX+Rapa组标本。RT-PCR、Western Blot分别检测骨组织中促血管生成Slit3基因及蛋白表达水平。备用胫骨作冰冻切片,血小板-内皮细胞粘附分子（CD31）抗体、内皮粘蛋白（EMCN）抗体双染,共聚焦显微镜观察H亚型血管数目及分布。2、细胞实验:利用实验第二部分cont组、iron组、iron+si-NC组、iron+si-MT组成骨细胞,将各自培养基分别培养四组相同人脐静脉内皮细胞（HUVEC）。用划痕实验、小管形成实验分别检测HUVEC迁移能力、管形成能力,免疫荧光检测各组HUVEC中EMCN表达情况。结果:1、在体研究:与Wt+OVX组相比,△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组Slit3基因表达、蛋白表达、H亚型血管数目及分布明显减少,使用雷帕霉素后明显增加（p<0.05）,但△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组无明显差异（p>0.05）。2、离体研究:与cont组培养基培养的HUVEC相比,iron组和iron+si-NC组培养基培养的HUVEC其迁移能力、管形成能力明显抑制,EMCN表达明显减少,iron+si-MT组上述指标明显恢复（p<0.05）。结论:雷帕霉素在铁蓄积高转换骨质疏松中可以促进Slit3基因表达、蛋白表达、增加H亚型血管数目及分布,mTOR抑制后HUVEC活性增强,具有改善血管形成作用。第四部分雷帕霉素改善铁蓄积高转换骨质疏松的机制研究目的:研究雷帕霉素改善铁蓄积高转换骨质疏松的作用机制。方法:1、细胞实验:利用实验第二部分cont组、iron组、iron+si-NC组、iron+si-MT组成骨细胞,将各自培养基分别培养四组相同HUVEC。RT-PCR、Western Blot（或ELISA）检测细胞中mTOR、STAT1、Cxcl9、VEGF、KDR（VEGF受体）、p KDR等相关基因及通路蛋白表达水平。免疫荧光检测成骨细胞和HUVEC中KDR的磷酸化水平。2、动物实验:利用实验第二部分Wt+OVX组、△Hep+OVX组、△Hep+OVX+CMC组、△Hep+OVX+Rapa组标本。RT-PCR、Western Blot检测骨组织中mTOR、STAT1、Cxcl9、VEGF、KDR（VEGF受体）、p KDR等相关基因及通路蛋白表达水平。结果:1、离体研究:h FOB1.19细胞在接受FAC干预后（即iron组）mTOR及其下游STAT1、Cxcl9、VEGF等基因、蛋白表达上升,p KDR表达下降,在mTOR特异性si-RNA转染后（即iron+si-MT组）,上述指标明显恢复（p<0.05）。iron组和iron+si-NC组无明显差异（p>0.05）。2、在体研究:铁调素敲除的转基因去卵巢小鼠（即△Hep+OVX组）较Wt+OVX组,骨组织中mTOR及其下游STAT1、Cxcl9、VEGF等基因、蛋白表达上升,p KDR表达下降,在使用雷帕霉素后（即△Hep+OVX+Rapa组）,上述指标明显恢复（p<0.05）。△Hep+OVX组和△Hep+OVX+CMC组无明显差异（p>0.05）。结论:铁蓄积通过mTOR/STAT1/Cxcl9通路,抑制p KDR,使VEGF及KDR有效结合减少,从而影响高转换骨质疏松骨量恢复。雷帕霉素可以靶向mTOR,改善“骨生成/血管形成”,具有成骨作用。
二、成骨细胞对血管内皮细胞增殖与形态的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、成骨细胞对血管内皮细胞增殖与形态的影响（论文提纲范文）
（1）锌离子刺激巨噬细胞分泌的外泌体对内皮和成骨细胞功能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 外泌体概述 |
| 1.1.1 外泌体形成与特征 |
| 1.1.2 外泌体与受体细胞相互作用 |
| 1.2 外泌体的生物学功能 |
| 1.2.1 外泌体的组成 |
| 1.2.2 外泌体的生物学功能 |
| 1.3 外泌体提取和鉴定 |
| 1.3.1 外泌体提取方法 |
| 1.3.2 外泌体的鉴定方法 |
| 1.4 巨噬细胞对骨整合的调节 |
| 1.5 巨噬细胞源性外泌体 |
| 1.6 锌离子的生物学特性 |
| 1.7 课题的研究内容和意义 |
| 1.7.1 本课题研究内容 |
| 1.7.2 本课题的研究意义 |
| 第2章 Zn离子对巨噬细胞功能的影响 |
| 2.1 主要实验设备 |
| 2.2 主要实验试剂耗材 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞培养基配制 |
| 2.3.2 细胞培养 |
| 2.3.3 Zn对巨噬细胞毒性 |
| 2.3.4 细胞增殖 |
| 2.3.5 巨噬细胞形态 |
| 2.3.6 巨噬细胞黏附及骨架 |
| 2.3.7 巨噬细胞相关基因表达 |
| 2.3.8 统计分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 本章小结 |
| 第3章 Zn离子刺激巨噬细胞源性外泌体表征与分析 |
| 3.1 实验主要设备 |
| 3.2 实验试剂及耗材 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 巨噬细胞源性外泌体的提取 |
| 3.3.2 巨噬细胞源外泌体蛋白定量检测 |
| 3.3.3 巨噬细胞源外泌体扫描电子显微镜观察 |
| 3.3.4 Zn离子浓度对巨噬细胞外泌体分泌的影响 |
| 3.3.5 巨噬细胞源外泌体标志蛋白检测 |
| 3.3.6 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 本章小结 |
| 第4章 巨噬细胞源性外泌体对内皮细胞功能作用 |
| 4.1 主要实验设备 |
| 4.2 实验试剂及耗材 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 配制内皮细胞培养基 |
| 4.3.2 内皮细胞复苏培养 |
| 4.3.3 内皮细胞对巨噬细胞源外泌体摄取 |
| 4.3.4 内皮细胞黏附及骨架 |
| 4.3.5 内皮细胞形态 |
| 4.3.6 内皮细胞VEGF测定 |
| 4.3.7 内皮细胞NO测定 |
| 4.3.8 细胞迁移实验 |
| 4.3.9 内皮细胞体外成血管能力 |
| 4.3.10 统计分析 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 内皮细胞对巨噬细胞源外泌体摄取 |
| 4.4.2 内皮细胞的黏附 |
| 4.4.3 内皮细胞形态和骨架 |
| 4.4.4 内皮细胞VEGF因子分泌与NO合成 |
| 4.4.5 内皮细胞的迁移结果 |
| 4.4.6 内皮细胞的体外成血管能力 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 本章小结 |
| 第5章 巨噬细胞源性外泌体对成骨细胞功能影响 |
| 5.1 主要实验设备 |
| 5.2 实验试剂及耗材 |
| 5.3 成骨培养基配制及细胞复苏 |
| 5.4 实验方法 |
| 5.4.1 细胞黏附与骨架 |
| 5.4.2 成骨细胞形态 |
| 5.4.3 成骨细胞ALP活性 |
| 5.4.4 胶原分泌 |
| 5.4.5 成骨细胞摄取外泌体 |
| 5.4.6 统计分析 |
| 5.5 实验结果 |
| 5.5.1 成骨细胞黏附结果 |
| 5.5.2 成骨细胞形态与骨架 |
| 5.5.3 成骨细胞ALP结果 |
| 5.5.4 胶原分泌结果 |
| 5.5.5 成骨细胞摄取外泌体结果 |
| 5.6 讨论 |
| 5.7 本章小结 |
| 第6章 结论 |
| 6.1 结论 |
| 6.2 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
（2）含稀土碳酸化羟基磷灰石材料的制备及其应用于骨修复的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 口腔颌面部骨的形成和缺损修复 |
| 1.1.1 口腔颌面部骨的形成与自修复过程 |
| 1.1.2 口腔颌面部骨缺损疾病的治疗方法 |
| 1.2 口腔颌面部骨组织工程概述 |
| 1.2.1 骨组织工程中的种子细胞 |
| 1.2.2 骨组织工程中常用的生长因子及其功能简介 |
| 1.2.3 骨组织工程中常用的支架体系 |
| 1.3 骨缺损修复材料简介 |
| 1.3.1 骨修复材料的研究现状及性能要求 |
| 1.3.2 天然及人工合成的骨修复材料 |
| 1.3.3 骨组织中的羟基磷灰石 |
| 1.3.4 用于骨再生的支架材料 |
| 1.3.5 稀土在生物医学材料中的作用 |
| 1.4 本论文的设计思路和技术路线 |
| 1.4.1 设计思路 |
| 1.4.2 技术路线 |
| 第二章 碳酸化及稀土掺杂的羟基磷灰石仿生骨粉的制备 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验仪器与试剂 |
| 2.2.1 仪器 |
| 2.2.2 试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 钙-磷-碳酸体系的热力学平衡相图计算 |
| 2.3.2 碳酸化羟基磷灰石纳米骨粉的制备 |
| 2.3.3 碳酸化羟基磷灰石纳米骨粉的结构表征 |
| 2.3.4 碳酸根取代度的确定 |
| 2.3.5 形貌与化学组成分析 |
| 2.3.6 碳酸化羟基磷灰石纳米骨粉的稀土荧光标记检测 |
| 2.4 结果与讨论 |
| 2.4.1 模拟生物矿化环境下的钙-磷-碳酸根热力学平衡相图与矿化因素 |
| 2.4.2 碳酸化羟基磷灰石材料的结构 |
| 2.4.3 碳酸化及矿化环境调控对羟基磷灰石形貌的影响 |
| 2.4.4 碳酸根取代度的确定 |
| 2.4.5 稀土离子标记的碳酸化羟基磷灰石可控制备及光谱性质 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞实验检测稀土掺杂及碳酸根取代的羟基磷灰石材料的生物学性能 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验部分 |
| 3.2.1 实验试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 MC3T3-E1 细胞培养 |
| 3.3.2 使用荧光染色观察细胞形态 |
| 3.3.3 使用CCK-8 法检测细胞增殖 |
| 3.3.4 使用活细胞/死细胞染色检测细胞的生长活性 |
| 3.3.5 使用碱性磷酸酶染色检测ALP活性 |
| 3.3.6 使用ALP定量检测试剂盒检测ALP活性 |
| 3.3.7 茜素红染色检测细胞形成的钙结节 |
| 3.3.8 Western blot检测各组材料对细胞成骨分化的影响 |
| 3.3.9 使用三维打印机打印支架 |
| 3.3.10 支架的形貌及成份表征 |
| 3.3.11 扫描电镜检测细胞在支架上的黏附 |
| 3.3.12 使用CCK-8 检测细胞在支架上的增殖 |
| 3.3.13 使用活细胞/死细胞染色检测细胞在支架上的生长活性 |
| 3.3.14 使用ALP染色检测支架上细胞的ALP活性 |
| 3.3.15 统计学分析 |
| 3.4 结果与讨论 |
| 3.4.1 MC3T3-E1 细胞的培养 |
| 3.4.2 各组材料浸提液对细胞形态的影响 |
| 3.4.3 各组材料浸提液对细胞增殖的影响 |
| 3.4.4 各组材料浸提液对细胞生长活性的影响 |
| 3.4.5 各组材料浸提液对细胞ALP染色的影响 |
| 3.4.6 各组材料浸提液对细胞ALP活性影响的定量分析 |
| 3.4.7 各组材料浸提液对细胞体外矿化的影响 |
| 3.4.8 各组材料浸提液对细胞分泌成骨特异性蛋白的影响 |
| 3.4.9 三维打印支架的宏观外形 |
| 3.4.10 三维打印支架的微观形貌、组分表征 |
| 3.4.11 细胞在各组三维打印支架上的黏附 |
| 3.4.12 细胞在各组三维打印支架上的增殖 |
| 3.4.13 细胞在各组三维打印支架上的生长活性 |
| 3.4.14 细胞在各组三维打印支架上的ALP活性 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 稀土掺杂及碳酸根取代的羟基磷灰石支架促大鼠颅骨缺损修复的实验研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 试剂 |
| 4.2.2 仪器 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 大鼠颅骨缺损模型建立及分组 |
| 4.3.2 术后大体观察 |
| 4.3.3 术后影像学观察 |
| 4.3.4 组织学观察染色 |
| 4.3.5 Masson染色 |
| 4.3.6 体内生物安全性评价 |
| 4.4 结果与讨论 |
| 4.4.1 大鼠临界骨缺损模型的建立 |
| 4.4.2 动物处死后标本的获取 |
| 4.4.3 动态Micro-CT观察缺损颅骨的修复 |
| 4.4.4 术后组织学检测 |
| 4.4.5 Masson染色表征 |
| 4.4.6 支架促血管再生 |
| 4.4.7 支架的体内安全性结果分析 |
| 4.4.8 支架促成骨性能讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 结论与展望 |
| 5.1 本论文的主要创新点 |
| 5.2 全文结论 |
| 5.3 展望 |
| 参考文献 |
| 作者简介及科研成果 |
| 致谢 |
（3）硝酸镧对骨骼重建过程中骨形成和血管生成的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 CKD-MBD的研究背景 |
| 1.2 骨代谢相关细胞 |
| 1.3 碳酸镧在CKD-MBD治疗中的作用 |
| 1.4 论文研究思路 |
| 第二章 硝酸镧对骨髓间充质干细胞的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 BMMSC的分离及培养 |
| 2.2.2 细胞活性评价 |
| 2.2.3 细胞分组及给药方法 |
| 2.2.4 成骨分化能力检测 |
| 2.2.5 细胞骨架Actin染色 |
| 2.2.6 细胞矿化能力检测 |
| 2.2.7 MSC成骨分化相关基因表达检测 |
| 2.2.8 结果统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 细胞活性评价 |
| 2.3.2 硝酸镧对BMMSC成骨分化能力的影响 |
| 2.3.3 细胞骨架Actin染色结果 |
| 2.3.4 硝酸镧对BMMSC矿化能力的影响 |
| 2.3.5 硝酸镧对BMMSC成骨分化过程相关基因表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 硝酸镧对骨髓源性单核细胞及共培养体系的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 BMM的分离及培养 |
| 3.2.2 细胞活性评价 |
| 3.2.3 TRAP检测破骨细胞数量 |
| 3.2.4 破骨细胞骨吸收情况 |
| 3.2.5 成骨细胞-破骨细胞共培养体系模型建立 |
| 3.2.6 结果统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 细胞活性检测结果 |
| 3.3.2 硝酸镧对破骨样细胞形成影响的结果 |
| 3.3.3 硝酸镧对破骨细胞骨吸收能力影响的结果 |
| 3.3.4 硝酸镧对骨体积分数及孔隙率影响的结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 硝酸镧对血管内皮细胞及共培养体系的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞活性评价 |
| 4.2.2 体外血管形成实验 |
| 4.2.3 MSC-HUVEC共培养体系模型的构建 |
| 4.2.4 结果统计分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 MTT细胞活性检测结果 |
| 4.3.2 硝酸镧对细胞成管能力的影响 |
| 4.3.3 硝酸镧对MSC-HUVEC共培养体系成血管化的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 镧化合物的骨代谢作用及安全性研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
（4）EPC-BMSC共培养复合PDPBB组织工程骨体系移植研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞与内皮祖细胞共培养体系在组织工程骨中的应用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）基于YAP/NF-κB信号通路探究TANIIA在骨关节炎中的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 TANIIA对骨关节炎样软骨细胞及YAP/NF-κB通路的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 TANIIA对骨关节炎小鼠关节软骨的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 TANIIA对骨关节炎小鼠软骨下骨的影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 HIPPO信号通路中关键蛋白YAP/TAZ在调节骨稳态中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文 导师评阅表 |
（8）PDGF-BB联合TGF-β1在骨折修复中的表达及其作用机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 第一部分 骨组织损伤修复过程中PDGF-BB及TGF-β1表达变化及其功能的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 PDGF-BB及TGF-β1诱导间充质干细胞表达及作用机制 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第三部分 PDGF-BB和TGF-β1诱导体外间充质干细胞成骨分化的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第四部分 PDGF-BB与间充质干细胞对内皮祖细胞的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文文章 |
（9）成纤维细胞联合血管内皮细胞促进脂肪干细胞增殖及成骨分化研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 血管内皮细胞、脂肪干细胞及成纤维细胞的鉴定及体外培养 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 六、参考文献 |
| 第二章 通过共培养血管内皮细胞及成纤维细胞诱导脂肪干细胞成骨分化的研究 |
| 一、引言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、结论 |
| 六、参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 成纤维细胞的生物学特性及分化潜能 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
（10）雷帕霉素改善铁蓄积高转换骨质疏松中“骨生成/血管形成”的基础研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 一、骨代谢的组成 |
| 二、骨代谢与骨质疏松 |
| 三、铁蓄积与骨质疏松 |
| 四、mTOR与铁蓄积骨质疏松 |
| 参考文献 |
| 第一部分 铁蓄积对小鼠、成骨细胞中mTOR水平及小鼠骨量的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 雷帕霉素在铁蓄积高转换骨质疏松中的骨生成作用 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 雷帕霉素在铁蓄积高转换骨质疏松中的血管形成作用 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 雷帕霉素改善铁蓄积高转换骨质疏松的机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 2.实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述1 铁稳态对 mTOR 信号通路的影响 |
| 参考文献 |
| 综述2 mTOR 信号通路及在间充质干细胞中的调控 |
| 参考文献 |
| 综述3 mTOR 和骨代谢关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 英汉主要缩略词表 |
| 在读期间撰写论文及科研情况 |
| 致谢 |
四、成骨细胞对血管内皮细胞增殖与形态的影响（论文参考文献）
- [1]锌离子刺激巨噬细胞分泌的外泌体对内皮和成骨细胞功能的影响[D]. 刘家川. 太原理工大学, 2021(01)
- [2]含稀土碳酸化羟基磷灰石材料的制备及其应用于骨修复的实验研究[D]. 刘鹏. 吉林大学, 2021(01)
- [3]硝酸镧对骨骼重建过程中骨形成和血管生成的影响[D]. 邹丹丹. 河北大学, 2021(09)
- [4]EPC-BMSC共培养复合PDPBB组织工程骨体系移植研究[D]. 郑凡. 昆明医科大学, 2021
- [5]基于YAP/NF-κB信号通路探究TANIIA在骨关节炎中的作用及机制[D]. 姜任东. 新疆医科大学, 2021(08)
- [6]H型内皮细胞在成血管-成骨偶联中的作用[J]. 王峰,徐佳,孔令驰,康庆林. 中华创伤骨科杂志, 2020(07)
- [7]成骨细胞源性外泌体miRNA调节血管内皮细胞衰老的分子机制[D]. 鲁晴. 广西医科大学, 2020
- [8]PDGF-BB联合TGF-β1在骨折修复中的表达及其作用机制的研究[D]. 王宗江. 山东大学, 2020(08)
- [9]成纤维细胞联合血管内皮细胞促进脂肪干细胞增殖及成骨分化研究[D]. 杨桂然. 昆明医科大学, 2020
- [10]雷帕霉素改善铁蓄积高转换骨质疏松中“骨生成/血管形成”的基础研究[D]. 吴加东. 苏州大学, 2020(06)