基因工程下游标准化体系工艺技术研究

基因工程下游标准化体系工艺技术研究

刘道洁[1]2003年在《基因工程下游标准化体系工艺技术研究》文中进行了进一步梳理基因工程产品的生产是一项十分复杂的系统工程,可分为上游和下游两个阶段,以分离目的基因、构建工程菌为主要内容的上游工艺是研制基因工程产品必不可少的基础,而作为下游工艺核心内容的工程菌的发酵培养、目的蛋白的分离纯化却直接控制着整个基因工程产品的质量、产量。本课题利用基因工程技术,重点从基因工程下游阶段着手研究,利用最新现代生物技术研究并建立经优化的高密度发酵工艺模式及高效分离纯化包涵体重组蛋白模式。 一.研究并建立一种适于目的蛋白高效表达的高密度发酵工艺模式 高密度发酵中,人们最关心的问题主要是质粒稳定性的维持、外源基因的高效表达及对下游纯化的影响。针对这些问题,我们采用分批补料培养的方法优化发酵培养基配方及部分发酵条件,探索出即适于外源基因高效表达,又利于产品纯化的发酵工艺。以我室构建并稳定表达的重组质粒pBV220-γ-IFN、pBV220-HGFα、pBV220-HGFβ、pBV220-hPK5为模型,分别从不同的表达宿主菌中筛选出一种适合大规模生产的菌种BL21(DE3),该工程菌株连续传代100代表达质粒不丢失,表达量稳定;采用B.Braun公司的BIOSTAT-C15L自控发酵罐,运用分批补料技术分别进行四种工程菌的高密度发酵,通过优化工程菌发酵的培养基配方及优化部分发酵条件(通气量、搅拌速度、补料速度),最终建立一种适于目的基因高效表达的高密度发酵工艺模式。发酵密度OD_(600)=40—42,SDS—PAGE及凝胶密度扫描分析目的基因产物占菌体总蛋白20%以上。 二.研究并建立一种包涵体中高效分离纯化目的蛋白的优化模式 重组蛋白分离纯化工艺中分离效率的提高、生物活性效率的提高及工艺的稳定性是尤其重要的,针对这些问题,我们在层析纯化前尽山西医科大学生物化学与分子生物学2003届硕士学位论文可能地提高包涵体纯度,并选择合适层析方法的同时合理的组合色谱分离单元。以大肠杆菌内包涵体形式表达的重组蛋白重组人Y一工FN、HGFa、HGFp、hPKS为模型,系统研究包涵体的洗涤及其色谱层析纯化工艺,采用超声接合溶菌酶法破碎菌体后,用含有低浓度尿素的包涵体洗涤液反复超声洗涤,采用最新反相色谱纯化技术SOUCE30RPC分离包涵体蛋白,经SDS一PAGE及凝胶密度扫描分析,目的基因产物占菌体总蛋白的90%以上,杂蛋白明显减少;包涵体复性后,采用AKTApurifier层析仪、Sepharose Fast Flow、Sephaerayl系列凝胶填料以及HitraP Selection Kit及XK型系列层析柱利用不同目的蛋白的各种理化特性不同运用叁步纯化策略对重组人7一IFN、HGFa、HGFp、hPKS分别进行高效色谱纯化,筛选优化条件从而建立了一种有效的从包涵体中分离纯化目的蛋白易于放大的工艺模式,纯化产物纯度>98%。结论: 总之,通过对发酵罐中重组工程菌各种培养因素的研究,建立了一种高密度、高表达发酵工艺体系,为重组蛋白的后续纯化提供了大量、稳定的原料供应;通过对不同目的蛋白的色谱行为的系统研究,建立了一种高效稳定、快速简洁、易于放大的包涵体重组蛋白分离纯化体系。目前,利用基因工程技术生产目的蛋白已在我国得到广泛发展,对于重组产物而言其下游工艺尤其重要,本课题为基因工程下游发酵、纯化工艺路线探索出一个切实可行的程序,同时也为基因工程产品产业化放大提供了一个有益的借鉴。

吴建文[2]2006年在《中国制药产业政策研究》文中进行了进一步梳理制药产业是关乎国计民生的重要产业部门,中国制药产业经过数十年发展,已经形成了较强的生产能力,但同时也面临技术创新能力较差、市场秩序混乱、自然资源过度消耗等困境。随着中国全面加入WTO,尚不足够强大的中国制药产业面临着严峻的国际竞争形势,要想迎头赶上,政府的产业政策支持不可或缺。同时,经济体制改革、国有企业制度改革和医疗卫生制度改革等因素也对制药产业的发展有着直接的影响,这些变数都在政府的掌控之中。因此,制药产业是深受政策影响的产业部门,研究制药产业政策有着重要的现实意义。本文通过分析中国制药产业发展的历程与现状,归纳出该产业技术落后和制度变迁两个主要特征,依托这两个特征对现行制药产业政策进行了有侧重的系统研究,在此基础上针对其缺陷提出了完善建议。全文的结构建立在BCP范式之上。BCP范式是对经典的产业组织分析方法SCP范式的运用和拓展。其中B代表产业政策背景(Background),C代表产业政策行为(Conduct),P代表产业政策效果(Performance)。产业政策背景包括:①产业的特殊经济属性和发展现状;②相关产业部门之间的关联效应;③既有产业政策措施的时滞效应;④相关政策措施的影响作用。产业政策行为包括:①产业技术政策措施及企业反馈;②产业组织政策措施及企业反馈(含部分产业内结构调整政策、产业布局政策);③其它政策措施及企业反馈。产业政策绩效则可以通过本文针对制药产业特征设定的双重指标——经济目标和社会目标的实现程度来衡量。在本文的核心章节中,第叁章是对中国制药产业政策背景的分析,内容包括制药产业的特殊经济属性、中国制药产业发展的历程与现状、医院等相关产业部门的影响、中国既有制药产业政策措施的时滞效应、医疗体制改革等相关政策措施的影响作用等。第四章和第五章分别对现行中国制药产业技术政策和中国制药产业组织政策进行了具体分析。研究发现,当前中国制药产业政策存在的核心问题是缺少政府政策部门和产业界的有效对话机制。这一缺陷在产业技术政策方面的负面影响是:政府技术推进政策与企业技术发展需求的脱节,企业研究发展行为与市场实际需求的脱节,其中后者又被前者强化。在产业组织政策方面的负面影响是:中国制药产业组织政策执行过程中普遍存在隐性博弈行为,这些行为导致了现实中的市场行为扭曲和市场结构混乱。第六章和第七章围绕制药产业政策在经济目标和社会目标两个方面的实现程度,从前文对现行政策缺陷的分析出发,提出了本文作者关于完善制药产业政策的补充建议。在这些补充建议中,特别设计了为中国制药产业发展争取时间和空间的产业保护模型、遏制制药企业违规倾向的双边博弈模型、以及针对用药安全事故频发的药品安全保证模型,进一步夯实了部分产业政策措施的理论基础和实施这些措施的现实依据。

佚名[3]2013年在《第7章 中国企业自主创新企业案例分析篇》文中进行了进一步梳理7.1中国有色:用创新谱写发展新篇章2011年3月21日,科技部、国务院国资委、全国总工会联合公布了第叁批创新型企业名单,中国有色矿业集团有限公司(以下简称公司)在154家企业中名列第一位,标志着公司基本完成了"由传统型企业向创新型企业跨越"的阶段性目标。2013年7月25日,公司凭借在科技创新和提升自主创新能力等工作方面的突出业绩,荣膺国务院国资委颁发的2010~2012年央企负责人经营业绩考核第叁任期"科技创新企业奖"。正是在卓有成效的自主创新、科技支撑战略的引领下,公司的改革发展、生产经营各项工作

李巍[4]2011年在《城市圈创新发展中的信息保障研究》文中研究表明我国转变经济增长方式的步伐显着加快,一方面大力促进创新带动的产业升级,一方面深入推进区域差别化发展战略,行政治理中加强了区域治理权限。这些工作同步推进之中,城市圈作为国内最具发展基础和最具创新活力的区域龙头成为新发展蓝图中创新与改革的重要基地。如何将这些挑战性工作目标融合在一起予以实现,是区域跨越式发展的关键。城市圈具有国内最为优越的发展条件,资源汇聚、市场繁荣,在信息化、网络化环境下,具有推动以知识创新为动力的产业创新发展和区域联动发展的有利条件。将两项发展主题合并考虑,在城市圈创新发展目标下定位信息保障体系发展目标,可以通过创新信息保障服务整合和利用国内外创新信息资源,弥合地域发展中由知识信息分布不平衡带来的创新资源鸿沟,有力促进本地区高级生产要素的创生,降低经济发展的自然资源依赖度,改善社会创新发展模式,促进关联主体间的协同创新,通过提升面向产业增值全过程的信息化保障促进产业升级发展,促进不同发展水平的地域之间的产业联动,从而促进城市圈创新发展。在城市圈创新发展基础上,该信息保障体系可以通过与其他信息系统的业务协同加强城市圈对内、对外的功能辐射与服务拓展,加强区际联系,增强本地区影响力,带动其他地区共同发展。本文深入探究国内外典型城市圈创新发展模式与发展规律,从系统论、协同论和产业创新发展的角度,在信息科学最新研究成果基础上,解析城市圈创新发展规律、创新系统层次结构以及创新价值迁移规律,从中定位开放化、社会化创新中信息服务需求变革趋向,探寻有利于促进创新活动协同组织的城市圈创新信息保障系统变革方向与具体实现。最后,以国内城市圈创新信息服务平台实践为案例分析现实工作开展的经验与不足,加深对这一研究论题的认识。文中有图52幅,表24个。全文共8章,各章内容如下:本文第1部分考察国内外有代表性的城市圈创新发展实践并概括其创新发展模式,通过对比分析揭示城市圈可持续创新发展经验以及共性问题,结合耗散结构理论、协同发展理论以及产业经济学视角下城市圈创新体系竞争力理论探索城市圈圈域互动纵深发展,为总结城市圈创新发展基本规律打下基础。第2部分从系统论出发,将创新要素、创新结构与区域发展中不同地区的能量转换规律结合起来构建城市圈创新发展的结构化模型;从静态和动态发展角度,揭示创新系统的结构层次以及城市圈创新发展的阶段特征,结构化和阶段性发展将引起创新发展信息与信息服务需求的变革;从国家战略变革角度探寻我国城市圈改革发展方向和创新发展动力源泉;概括城市圈创新发展基本机制以及机制关联,明确新时期创新发展中信息机制的重要地位,以国外城市圈信息保障工作发展实际佐证发展创新信息保障是城市圈创新发展构图中的重要内容。第3部分分析创新活动演化趋势,调查研究创新主体信息需求及信息服务需求的现实满意度,发现现有服务系统的不足。从城市圈圈层互动创新模式的结构化发展以及创新系统的动态演进,揭示创新发展中创新用户需求的层次性和结构变化,探寻社会各方知识信息及服务需求变革方向,为变革信息保障体系建设打下基础。第4部分从社会创新环境变革与创新信息需求变革出发,探讨既有信息保障与新的社会化创新模式之间的不适应,明确系统转型要求,重新定位信息保障工作目标体系,摸索建立创新活动链全程覆盖的信息保障体系,指出需要拓展的工作内容。第5部分构建城市圈创新信息建设与利用的多维协同模式,明确城市圈创新发展信息资源协同配置内容以及协同实现方法,探索分布式环境下资源共享利用、信息保障工作多层次系统化协同组织,明确城市圈创新信息保障系统建设工作推进过程中的保障工作内容与管理控制原则。第6部分从技术实现的角度讨论如何在系统建设中增强跨系统协同服务以及促进用户创新行为交互,并在此基础上增强区域特色资源建设以及在特定领域知识服务能力。对平台服务组织原则、协同技术架构和平台技术实现进行分析,搭建了云计算环境下基于SOA的平台协同技术层次化模型,更进一步说明平台如何面向协同创新拓展互动业务。第7部分对以上海研发公共服务平台为核心的长叁角城市圈信息保障体系实践做出分析,解析其平台系统构成、资源组织与协同服务业务开展状况,从目标定位、运行特点、体制机制创新以及服务组织方面揭示其比较优势,总结平台建设经验。最后对本文进行了总结,进一步提炼观点,指出了研究中存在的不足之处,展望了该领域后续研究方向。

谷中原[5]2007年在《农村发展的农业多功能研究》文中研究表明农业是人类通过生产劳动,利用农村社区资源,从事各种涉农产业的经济部门。从经济史角度看,农业是人类创造出来并不断完善的为自己提供农产品的生产模式;从经营形态来看,农业具有多种经营模式和经营手段;从生产本质看,农业具有多功能性。农业的多功能性表现为农业同时具有人文功能、生态功能、经济功能、社会功能。农业多功能的显现是一个从潜功能向显功能转变的漫长过程。随着人类社会发展,农业经营形态逐渐地从单功能转向有限功能、从有限功能转向多功能。多功能农业的兴起不仅是因为人类对农业功能认识水平的提高,更多的是因为社会系统中的农业要素的结构资源发生了变革。可以说,社会系统的经济要素、文化要素、意志要素的协同变革直接导致了多功能农业的兴起。多功能农业具有传统农业不同的特质,从其自然性来说,多功能农业具有对自然的依赖性、生产的地域性、社会圈与自然圈的融合性;从人文性来说,多功能农业具有人类强干预性、维护地域文化、人文关怀、借用文化活动形式发展农业的特点;从生产特点来说,多功能农业具有开放性经营、需要高素质经营主体、效率空间增大、标准化生产、经营效益复合性等特点。多功能农业体系目前主要由有机农业、生态农业、旅游农业、文化农业、能源农业、都市农业等经营模式和产业构成。多功能农业发展中存在的冲突与同一并存现象直接决定着我们必须制定一个满足“四效合一”、“四能皆备”、“叁农发展”的综合性要求的多功能农业评价体系,为多功能农业良性运行创造一个良好的制度环境。多功能农业评价体系由经营性指标、功能性指标、效益性指标、发展性指标构成,是考核多功能农业项目的特性、产生、运行过程以及社会价值的评价标准。为了推动传统农业向多功能农业转变和推动多功能农业健康发展,我们必须根据多功能农业评价体系和多功能农业经营者与管理者的发展意图,建立起一种经营者与管理者良性互动机制。相对传统农业而言,多功能农业具有全面的、可持续的、内发性的推动“叁农发展”的效能。就推动农业经济发展而言,多功能农业从改善农业生产条件、提高农业生产效率、提高农产品商品率、转变农业经营形式、走可持续发展道路等途径,推动着农业经济发展。就推动农民和农村社会发展来说,多功能农业从促使农民现代化、充分利用农村非物质文化资源、农村社区公共事业发展等维度,推动农民和农村社会发展。相比而言,多功能农业与工具改造运动、土地关系调整、乡镇企业、农民区际流动等在我国陆续出现的动力因素不同,具有内涵发展、综合发展、人文关怀、可持续发展的特征,是农村发展的可靠动力。既然多功能农业具有传统农业不可比拟的发展效能,世界上的每个国家不能错过推动农业发展的难得机遇,应该用明确的发展目标和发展对策积极回应多功能农业的兴起。

林江[6]2005年在《中华民族传统医药产业化发展问题研究》文中指出从民族特性来看,中华民族传统医药产业不仅是对汉族人使用的中医药的开发和经营,而且包括对藏药、蒙药和瑶药等少数民族的传统医药的开发和经营。为了叙述的方便,本文以“中医药”的大概念来统称我国各民族的传统医药,以“中药”来统称我国各民族的传统药物。 我国的中药产业基本定位是以中药农业为基础、中药工业为主体、中药商业为枢纽和中药知识产业为动力的大中药产业,这正是本文研究的对象。目前,我国中药工业和商业企业虽有了一定规模,但产业化程度不高;以中药材专业化生产为特点的中药农业,还没有形成一定的产业规模;作为以科研、教育、信息、技术服务、技术转让等为主要内容的中医药知识产业则刚刚兴起。另外,根据中医药理论和临床诊疗需求,研究开发中医药的诊断、治疗、康复以及保健等方面的仪器、设备与器械等,也有望成为一个新兴产业。本文是从民族经济学的视野,研究凝聚着中华民族文化精粹的中医药学的产业化发展问题。本文的选题意义是: 其一,中医药的现代化开发关系到占中国大多数人口的农民的脱贫致富和我国全面建设小康社会的全局问题。2004年2月29日来自《中国青年报》(警惕我国农村新的致贫因素)的一组数据显示,中国农村医疗保险享有率仅有12%,而且多是商业保险而不是社会保险。“因病致贫、返贫”在农村已不是个别现象。即使在经济相对比较发达的江苏省农村,在贫困户中,因病致贫和因病返贫的也占60%以上。据调查,我国农村每年因常见和重大疾病造成的经济损失已高达400多亿元,农村贫困人口中50%左右为因病致穷或因病返贫。当前,以西医为主的医疗体系费用高昂,如果不实行中西医结合的医疗体系,农民就越难以承受,就越贫困。这就是说,建立具有中国特色的医药学体系,对于中国这个巨大的农村市场,对于我们这个多民族的国家,有着非常重要的现实意义和深远的历史意义。这是要达到经济和社会、城市和乡村、文明和生态、人与自然共同繁荣和可持续发展的需要,也是我们在建设社会主义和谐社会中面临的重要问题。 其二,加入WTO以后,我国已成为国际上一个巨大的传统医药市场。以现代科技手段开发中药是我国“入世”后可以取得药品自主知识产权的主攻方向之一,是我国参与国际药品市场竞争、扩大出口的重要手段。当前,我国中医药行业市场运营绩效表现不够理想,中药工业效益增长弱于行业平均水平,产品科技化发展的速度缓慢,增长乏力。这一状况如不能得到迅速改善,不仅我国在国际现代植物药市场上与西方国家的差距会进一步拉大,而且在国内市场上也将面临发展后劲不足、市场份额不断地被蚕食的困境。 其叁,开展传统医药产业化的研究,是人类医疗模式由单纯治疗转向预防与保健相结合的模式的需要,是创新药物研究开发的需要,是经济发展的需要,这是由传统医药是中华民族的一项重要战略资源的禀赋决定的,是民族经济学研究的题中之义。中华民族传统医药产业化发展问题研究 中医药产业正处在由传统生产方式向产业化方式转换的过渡之中。之所以说过渡是因为它的规模还不够大,标准尚不完整,规范化程度也不高。要真正实现产业化,是一个复杂的系统工程。本文共分九章,第一章通过简要考证中华民族传统医药学形成和传播的历史,论述中华文化传播对于开拓中医药产业的重要性,介绍了笔者对于建立现代的具有中国特色的中华民族传统医药学体系的思路。第二章在对中医药学科特点分析的基础上,提出了中医药产业化的基本条件及推进战略。第叁章结合最新数据资料,对我国初具规模的中医药产业结构体系作了分析,并进行了与整个医药行业的比较,明确了己取得的成绩与尚存在的不足。第四章对我国传统医药的供需状况、市场培育策略与市场管理模式作出探讨。第五章按照经济发育的不同层面,对具有代表性的国家的传统医药开发利用状况作了介绍,以冀对中华民族传统医药产业化发展有所帮助。第六章从理论上论证了传统医药产业是我国西部地区的优势产业,并根据西部地区的传统医药发育基础对西部地区传统医药产业运作模式作出探讨。第七章对中医药产业核心竞争力作出判断,结合我国医药经济发展的实践,对中医药产业国际经营理论进行研究。第八章对中关村科技园区最大的现代中药企业—北大维信生物科技有限公司和在传统中药现代化诸方面走在了全国同行前列、创下单一品种销售额超过10亿元纪录的天津天士力集团作了介绍。第九章根据文献资料,以同仁堂为标杆,分析了创建于明、清两代的目前尚在经营的中药老字号企业经久不衰的经验。 本文力求在理论研究、研究方法和主要论点观点有所创新: ①本文从民族经济学提供的独特的“民族”视角,而不局限于“民族区域”的空间范围,根据翔实的史实,钩稽了中华民族传统医药学在各民族的优秀文化荟萃中形成、在交流中发展的轨迹;围绕着整个传统医药体系的创新思路,分别探讨了传统医药的现代化发展、产业结构与发展战略、科技创新与投资重点、实施步骤及成功案例。认为我国的传统医药各具鲜明的民族特色,传统医药理论深深打上了民族文化的烙印,传统医药的开发与营销不仅仅是产品的开发与营销,也是文化的开发与营销。 ②中

参考文献:

[1]. 基因工程下游标准化体系工艺技术研究[D]. 刘道洁. 山西医科大学. 2003

[2]. 中国制药产业政策研究[D]. 吴建文. 复旦大学. 2006

[3]. 第7章 中国企业自主创新企业案例分析篇[C]. 佚名. 中国企业自主创新评价报告(2013). 2013

[4]. 城市圈创新发展中的信息保障研究[D]. 李巍. 武汉大学. 2011

[5]. 农村发展的农业多功能研究[D]. 谷中原. 湖南农业大学. 2007

[6]. 中华民族传统医药产业化发展问题研究[D]. 林江. 中央民族大学. 2005

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