启动子及信号肽筛选提高普鲁兰酶在地衣芽孢杆菌中的表达

启动子及信号肽筛选提高普鲁兰酶在地衣芽孢杆菌中的表达

论文摘要

普鲁兰酶(pullulanase)是一种淀粉脱支酶,在淀粉糖化加工等工业生产中具有重要的应用价值。选用地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis) BL10作为表达宿主,为了提高其中的普鲁兰酶产量,对来自枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168和地衣芽孢杆菌BL10中的15种不同信号肽以及4种不同启动子进行筛选,构建了不同的重组工程菌株,最终发现在以P43为启动子、apr为信号肽的条件下,上清液中普鲁兰酶的表达量最高,酶活可达12 U/m L,且测得其最适反应温度为60℃,最适p H为4.5。结果表明通过对启动子及信号肽进行筛选是提高重组工程菌株中目的蛋白表达量的一种有效手段。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株和载体
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 培养基
  •   1.4 载体p HY300PLK-pul-TamyL的构建
  •   1.5 信号肽筛选表达菌株的构建
  •   1.6 启动子筛选表达菌株的构建
  •   1.7 目的蛋白普鲁兰酶的发酵表达
  •   1.8 普鲁兰酶酶活测定
  •   1.9 普鲁兰酶最适温度和p H的测定
  •   1.1 0 数据统计与分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 普鲁兰酶重组表达菌株构建
  •   2.2 信号肽对普鲁兰酶表达量的影响
  •   2.3 启动子对普鲁兰酶表达量的影响
  •   2.4 酶学性质测定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王倩,初晓宇,朱宝成,伍宁丰

    关键词: 地衣芽孢杆菌,普鲁兰酶,启动子,信号肽

    来源: 中国农业科技导报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 河北农业大学生命科学学院,中国农业科学院生物技术研究所

    基金: 国家863计划项目(2013AA102804)资助

    分类号: Q78

    DOI: 10.13304/j.nykjdb.2019.0195

    页码: 61-69

    总页数: 9

    文件大小: 1543K

    下载量: 213

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