高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验研究

高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验研究

郁湘云

深圳市龙岗中心医院(广东深圳518116)

【摘要】目的建立高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷方法以C18反相柱为色谱柱,甲醇—水为流动相。检测波长270nm,用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取剂。结果平均回收率为98.38%。r=0.9995,线性关系良好。结论此方法灵敏、准确,适用于龙胆苦苷的测定。

【关键词】高效液相色谱法清肝胶囊龙胆苦苷

[中图分类号]R967[文献标识码]A[文章编号]1810-5734(2010)7-0086-02

龙胆为龙胆科植物,其根及根茎含龙胆苦苷,龙胆苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色谱法(HPLC)测定复方制剂中的龙胆苦苷,其操作步骤简便,样品回收率高,重现性好,结果可靠,现报道如下。

1仪器与试药

1.1仪器

紫外分光光度计(日本岛津UV-260);高效液相色谱仪(Waters510泵,490紫外检测器,740数据处理仪);薄层自动涂铺器(瑞士CAMAG);薄层层析点样台TLC-SP-1(西安市秦西机械厂);离心机800型(江苏医用设备仪器厂);微量进样器(上海医用激光仪器厂)。

1.2试药

中性氧化铝(100~200目)(上海五四试剂厂);硅胶GF254(青岛海洋化工厂);龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所);乙酸乙脂、甲醇、氯仿均匀为分析纯(上海试剂一厂)。

2含量测定

2.1色谱条件与系统适用性试验

用十八烷基硅胶为填充剂;甲醇—水(3:7)为流动相;检测波长为270nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。

2.2内标溶液的制备

精密称取咖啡因适量,加甲醇制成1ml含0.4mg的溶液,即得。

2.3测定法

精密称取龙胆苦苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液各5ml,摇匀,取10ul注入液相色谱仪,记录色谱图;另取本品中含龙胆粉量约0﹒5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加甲醇10ml,放置12h,时时振摇,精密加内标溶液2ml,加甲醇至刻度,摇匀,取10ul注入液相色谱仪,按内标法以峰面积计算,即得。

3试验方法与结论

3.1条件试验

3.1.1龙胆苦苷对照品的含量确定和水溶性实验

3.1.1.1龙胆苦苷的测定:照高效液相色谱法采用NucleosilC18柱(46cm×0.25cm),精密吸取含量测定项下配制的龙胆苦苷对照品溶液进样,以甲醇—水为流动相,连续重复进样3次,归一化法计算含量。

3.1.1.2水溶性实验:精密称取龙胆苦苷对照品0.2608g,加水1ml,根据操作规范[1],可见立即溶解。故认为龙胆苦苷对照品水溶性在易溶范围。

[SX(]1[]0.2608[SX)]=38.3ml/g

3.1.2样品与龙胆苦苷对照品紫外光谱对照取复方制剂样品和对照溶液2.5ml,分别在波长200~400nm间进行扫描。结果表明:二者紫外吸收曲线基本一致,在波长(271±1)nm处均有最大吸收。

3.1.3提取溶剂的选择:龙胆苦苷为裂环环烯醚萜单糖苷,极性大。清肝胶囊为复方制剂,成分复杂,提取溶剂的选择会影响下一步的薄层分离。因此,试用了甲醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂提取找出最佳提取溶剂。试验表明,甲醇对龙胆苦苷的提取效率高,同时出提出大量糖类水溶性杂质,影响薄层分离,干扰紫外吸收。而乙酸乙酯虽提取效率较差,但提取的糖类等杂质也较少。因此,采用乙酸乙酯—甲醇(70:10)的比例混合作提取溶媒;既能定量地提取龙胆苦苷,又能尽可能少地提出杂质,在该溶媒条件下的最大吸收波长为270nm。

3.2回收率试验

取清肝胶囊样品5份,精密称量,分别加入一定量的龙胆苦苷对照品,照含量测定项下的方法分别测定含量,计算回收率。

3.3精密度实验

3.3.1样品测定精密度实验取清肝胶囊样品6份,每份5g,照含量测定项下的方法试验,分别测定含量。

3.3.2薄层层析精密度试验取清肝胶囊样品5g,照含量测定项下的方法试验,在6块薄层板上点样[2],每块板上点2个点,测定含量。

3.4紫外光谱试验

取清肝胶囊与空白龙胆制剂各5g,分别照含量测定项下的方法制备供试品溶液,照分光光度法试验,在200~350nm间进行重叠扫描。结果表明,在270nm处,制剂中其它原料几乎不影响龙胆苦苷的测定。

3.5标准曲线的制备

取龙胆苦苷对照品约400mg,照含量测定项下的方法绘制标准曲线。回归方程为Conc=17﹒856A-0.0275,r=0.9995,曲线通过原点,线性相关较好。

4讨论

采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷的含量,样品的预处理是关键。在工艺上采用连续回流提取方法提取龙胆苦苷[3],至提取液近无色时,可提尽龙胆苦苷。其残渣经薄层层析检验,无龙胆苦苷斑点。提取液浓缩后加入水,龙胆苦苷转溶于水中,过滤,可除去提取中带来的脂溶性杂质;水溶液经氧化铝层析柱,甲醇洗脱,大部分色素等杂质被吸附[4],而龙胆苦苷被洗脱下来。柱层析洗脱过程中,采用100ml甲醇洗脱,龙胆苦苷几乎全部洗下来。

采用薄层层析方法,用硅胶GF254板分离,荧光熄灭法定位,龙胆苦苷斑点清晰,有利于刮板。

通过试验证实,采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷,方法准确、稳定、可靠。

参考文献

[1]卫生部药政局,中国药品生物制品检定所﹒中国药品检验标准操作规范[S]﹒北京:中国医药科技出版社,1996,65﹒

[2]吕武清,龙新华﹒中成药中的药材薄层色谱鉴别[M]北京:人民卫生出版社,1997,178-179

[3]庄越,曹宝成,萧瑞祥﹒实用药物制剂技术[M]北京:人民卫生出版社,1999,110-114

[4]王如治﹒药剂学[M]北京人民卫生出版社,1997,120﹒

标签:;  ;  ;  

高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验研究
下载Doc文档

猜你喜欢