慢病毒介导的小鼠CCR3基因RNAi载体的构建及其在肥大细胞中的表达

论文摘要

目的:构建筛选靶向趋化因子受体3（CCR3）-RNA干扰慢病毒表达载体,感染小鼠肥大细胞,观察该基因在肥大细胞中的表达及该病毒载体的干扰效率,为研究变应性鼻炎的发病机制奠定基础。方法:首先构建3对CCR3-短发夹RNA（CCR3-shRNA）序列,然后在shRNA慢病毒载体中分别插入3对双链的shRNA oligo,3个shRNA慢病毒重组质粒构建成功后,将重组载体和病毒包装的辅助质粒共转染293T细胞,从而获得慢病毒质粒,并将其转染入体外培养及纯化小鼠骨髓源性的肥大细胞。qRT-PCR检测肥大细胞CCR3mRNA的表达,Western Blot检测肥大细胞CCR3蛋白的表达。结果:经测序证实,成功构建CCR3-shRNA的慢病毒载体,转染293T细胞并进行病毒包装,最终获取高纯度的PDSO19-PL-CCR3慢病毒质粒,病毒滴度为3.7×108 TU/ml。以该慢病毒质粒感染小鼠肥大细胞,qRT-PCR和Western Blot检测示:CCR3-shRNA降低了小鼠肥大细胞的CCR3基因在mRNA和蛋白水平的表达。结论:成功构建了CCR3基因RNAi慢病毒表达载体质粒,发现其下调了小鼠肥大细胞CCR3基因mRNA及蛋白水平的表达,为进一步研究其在变应性鼻炎发病机制中的作用打下了基础。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 朱新华,彭海森,江银丽,伍书红,唐思艺,刘月辉

关键词: 趋化因子受体,干扰,慢病毒,肥大细胞

来源: 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2019年07期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,眼科与耳鼻咽喉科

单位: 南昌大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科

基金: 国家自然科学基金(No:81560171),江西省优势科技创新团队专项计划(No:S2016RCTDB0016),江西省科委支撑项目(No:20133BBG70071)

分类号: R765.21;Q78

DOI: 10.13201/j.issn.1001-1781.2019.07.013

页码: 628-634

总页数: 7

文件大小: 2044K

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