一种改良的DNA沉淀法在重组DNA转化大肠杆菌中的应用

一种改良的DNA沉淀法在重组DNA转化大肠杆菌中的应用

论文摘要

以构建pUC18-EGFP载体为例,通过对DNA连接产物进行沉淀处理,对普通的DNA沉淀法进行了改良.实验证明,采用改良的DNA沉淀法处理后的连接产物,转化大肠杆菌的效率约是对照组的10倍,并且大肠杆菌感受态细胞用量减少到10μL.这一改良的DNA沉淀法用CaCl2替代TE作为溶解沉淀DNA的溶剂,省略了用70%乙醇洗涤DNA沉淀的步骤,较普通的DNA沉淀法操作起来更为简便.

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料与试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 感受态E.coli的制备
  •     1.2.2 pUC18-EGFP重组DNA片段的制备
  •     1.2.3 DNA连接产物处理方法
  •     1.2.4 经沉淀法或高温处理后的DNA连接产物转化E.coli
  •     1.2.5 pUC18质粒转化感受态E.coli
  •     1.2.6 数据统计方法
  •     1.2.7 转化率的定义
  • 2 结果
  •   2.1 普通DNA沉淀法处理连接产物对E.coli转化效率的影响
  •   2.2 改良DNA沉淀法
  •     2.2.1 省略70%乙醇洗涤DNA沉淀相关步骤对连接产物转化E.coli效率的影响
  •     2.2.2 CaCl2溶解沉淀后的连接产物对E.coli转化效率的影响
  •   2.3 改良的DNA沉淀法节省了转化过程中感受态E.coli的用量
  •   2.4 改良的DNA沉淀法用于连接产物转化E.coli过程中的注意事项
  •     2.4.1 NaAc不能代替NH4Ac作为电荷中和剂
  •     2.4.2 不能用高温灭活T4 DNA连接酶替代沉淀DNA连接产物
  • 3 讨论
  •   3.1 改良的DNA沉淀法降低了非核酸成分对DNA连接产物转化E.coli的影响
  •   3.2 改良的DNA沉淀法更加适合于处理待转化的DNA连接产物
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 谭锬,伍金月,唐艺菲,李娜,虞佳,梁前进

    关键词: 重组,沉淀法,转化,大肠杆菌

    来源: 北京师范大学学报(自然科学版) 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 湖南省分子靶标新药研究协同创新中心/南华大学衡阳医学院,北京师范大学抗性基因资源与分子发育北京市重点实验室北京师范大学生命科学学院,南华大学蛋白质结构与功能研究所

    基金: 国家自然科学基金资助项目(31571394),湖南省分子靶标新药研究协同创新中心开放基金资助项目(0223-0002-0002000-57),南华大学大学生创新性实验计划资助项目(2017XJYZ041)

    分类号: Q78

    DOI: 10.16360/j.cnki.jbnuns.2019.02.009

    页码: 225-232

    总页数: 8

    文件大小: 4349K

    下载量: 273

    相关论文文献

    • [1].基于科学思维的“DNA是主要的遗传物质”教学设计[J]. 教育观察 2019(30)
    • [2].基于粪便DNA的贺兰山岩羊亲权鉴定和婚配制研究[J]. 生态学报 2019(22)
    • [3].通过调节蛋白酶K消化时长优化DNA提取方法[J]. 生物化工 2019(06)
    • [4].蛹虫草线粒体DNA与细胞核DNA进化关系的比较[J]. 微生物学报 2019(12)
    • [5].有毒有机物影响DNA酶解和抗生素抗性基因横向迁移[J]. 农业环境科学学报 2020(01)
    • [6].蓝莓栽培品种的DNA条形码[J]. 林业科学 2019(12)
    • [7].应用于多个沉香属物种鉴定的DNA条形码序列筛选[J]. 中国药学杂志 2019(23)
    • [8].抗核抗体和抗双链DNA检测在系统性红斑狼疮诊断中的意义[J]. 中国医疗器械信息 2019(23)
    • [9].幽门螺旋杆菌诱导的胃腺癌DNA甲基化基因修饰研究进展[J]. 中国老年保健医学 2019(06)
    • [10].DNA分析技术在法医物证鉴定中的应用[J]. 法制博览 2020(03)
    • [11].磁性纳米颗粒负载质粒DNA的研究[J]. 华南农业大学学报 2020(01)
    • [12].DNA智慧扶贫工作室教育扶贫策略与实践[J]. 科技风 2020(06)
    • [13].家畜冷冻精液DNA的纯化及影响因素分析[J]. 南京农业大学学报 2020(02)
    • [14].蝙蝠蛾拟青霉及金水宝胶囊的DNA条形码鉴定[J]. 中国实验方剂学杂志 2020(08)
    • [15].3种DNA分子标记法联合鉴别草珊瑚及其混伪品[J]. 中草药 2020(03)
    • [16].探讨无创DNA检测和羊水细胞染色体检查的意义[J]. 中国卫生标准管理 2020(03)
    • [17].乳头状甲状腺癌中线粒体DNA突变的研究[J]. 中国细胞生物学学报 2020(01)
    • [18].非标记表面增强拉曼光谱在DNA检测中的应用[J]. 激光生物学报 2020(01)
    • [19].彗星电泳检测草胺磷对蚯蚓体腔细胞DNA的损伤[J]. 广东农业科学 2020(01)
    • [20].基于DNA检测的肉制品鉴伪技术研究进展[J]. 食品工业科技 2020(08)
    • [21].绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的比较研究[J]. 畜牧与兽医 2020(03)
    • [22].环境DNA在水体中存留时间的检测研究——以中国对虾为例[J]. 渔业科学进展 2020(01)
    • [23].云斑白条天牛成虫不同组织部位DNA提取方法比较[J]. 滨州学院学报 2019(06)
    • [24].三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察[J]. 中草药 2020(07)
    • [25].DNA倍体分析系统在脱落细胞学及术中病理诊断中的应用[J]. 中国农村卫生 2020(03)
    • [26].DNA免疫吸附治疗重度活动性系统性红斑狼疮的疗效观察[J]. 中国社区医师 2020(07)
    • [27].红肉猕猴桃再生体系的建立及DNA条形码鉴定[J]. 植物生理学报 2020(03)
    • [28].蛋白质精氨酸甲基转移酶1调控DNA损伤修复和细胞凋亡[J]. 海洋科学 2020(03)
    • [29].基于密度梯度离心技术分离稳定同位素DNA的方法研究[J]. 实验科学与技术 2020(02)
    • [30].基于DNA链置换的可满足性问题的计算模型[J]. 阜阳师范学院学报(自然科学版) 2020(01)

    标签:;  ;  ;  ;  

    一种改良的DNA沉淀法在重组DNA转化大肠杆菌中的应用
    下载Doc文档

    猜你喜欢