谷胱甘肽双功能合成酶固定化研究

谷胱甘肽双功能合成酶固定化研究

论文摘要

对谷胱甘肽双功能合成酶(GshF)固定化载体进行了筛选,最终选择氧化石墨烯(GO)作为GshF的固定化载体,并对其固定化条件和固定化酶学性质进行了探讨。结果表明,固定化体系最优pH为8.0,温度为4℃,固定化时间为30 min,此时最大加载率达到90%,酶活回收率为45%。固定化体系中温度和pH的适用范围都得到了进一步提高。另外,对固定化酶的贮存稳定性和循环利用性进行了研究,结果表明在常温条件下贮存时,游离酶在第3天就几乎完全失活,而固定化酶仍保留约63%的酶活力。在重复循环利用6次后,固定化酶的酶活力仍保持在80%左右。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •     1.1.1 菌株和质粒
  •     1.1.2 材料与试剂
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 GshF的亲和纯化
  •     1.2.2 酶蛋白加载率测定
  •     1.2.3 酶固定化过程条件优化
  •     1.2.4 游离酶和固定化酶的酶学性质测定条件
  •       (1) 酶活力测定
  •       (2) 反应温度、pH以及Mg2+浓度梯度设定
  •     1.2.5 游离酶和固定化酶的贮存稳定性
  •     1.2.6 固定化酶重复利用性
  • 2 结果与分析
  •   2.1 固定化载体的筛选
  •   2.2 酶固定化参数的优化
  •     2.2.1 固定化时间对酶加载率影响
  •     2.2.2 固定化温度对酶活影响
  •     2.2.3 固定化体系pH对酶活力影响
  •     2.2.4 载体/酶质量比对加载率及相对活力影响
  •   2.3 游离酶和固定化GshF的影响因素和贮存稳定性
  •     2.3.1 温度的影响
  •     2.3.2 pH的影响
  •     2.3.3 Mg2+浓度的影响
  •     2.3.4 贮存稳定性
  •     2.3.5 重复利用性
  • 3 结 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王爱琪,张星,吴辉,李志敏,叶勤

    关键词: 谷胱甘肽,谷胱甘肽双功能合成酶,氧化石墨烯,固定化

    来源: 华东理工大学学报(自然科学版) 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

    基金: 上海市科委产学研医合作项目(13DZ1930200)

    分类号: Q814.2

    DOI: 10.14135/j.cnki.1006-3080.20180227001

    页码: 81-86

    总页数: 6

    文件大小: 1152K

    下载量: 220

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