付红雨(黑龙江哈尔滨市阿城区人民医院150300)
【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2010)30-0176-02
【摘要】目的对比两种方法RIA(放射免疫方法)和TR—FIA(时间分辨荧光免疫分析法)在胃镜消毒中氧化电位水(EOW)对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗原性破坏力的测量精度。方法试验以HBsAg阳性病人用后所污染胃镜作为消毒前对照，经去除有机物处理后EOW分别浸泡60秒和90秒，胃镜表面涂抹采样，分别用EIA和TR—FIA检测HBsAg。结果发现作用时间为60秒的标本中有4例测定值在临界值范围，TR—FIA检测为阳性，但RIA检测却为阴性；作用90秒的结果，两者检测均为阴性。完全相符。结论RIA方法检测EOW对HBsAg抗原性的破坏力的检测存在假阴性的情况，TR—FIA较之更为精确。并且建议在时间允许的情况下，适当延长消毒时间以保证消毒效果。
【关键词】时间分辨荧光免疫分析放射免疫分析氧化电位水
1.材料
1.1仪器与试剂1235AutoDeliria时间分辨荧光免疫分析系统由PerKinElmerwallac公司生产，γ-放射免疫分析仪采用北京核海高技术开发公司的HH6003型7放射免疫分析仪；氧化电位水生成器为陕西省宝鸡新宇有限公司生产。乙肝表面抗原(HBsAg)时间分辨荧光免疫分析法试剂和放射免疫试剂采用固相放射免疫测定盒，分别购自苏州新波生物技术有限公司和中国同位素公司北方免疫试剂研究所。
1.2标本人工污染的胃液作为消毒前对照；胃镜表面涂抹采样作为实验样品。
2.方法
2.1TR—FIA法HBsAg应用双抗夹心法，采用多克隆抗体包被反应孔，加入阴、阳性对照，参考标准品及待检标本，标本中如有相应的抗原与包被的多克隆抗体形成相应的复合物，再加入铕(Eu)标记单克隆抗体，即形成相应HB-sAb-HBsAg-Eu-HBsAb复合物；复合物与试剂中增强液作用，将复合物标记抗体上的Eu2解离到溶液中与增强液有效成分形成高强荧光强度的整合物，其荧光强度与样品中相应的被检测标志物成正比。
2.2RIA法严格按试剂盒说明操作。
3.结果
3.1HBsAg按临界值质控血清≥0.2ng/ml时为阳性，作用时间为60秒的情况下其测定结果。
有四份标本TR—FIA法检测为阳性，但RIA法检测为阴性，经测定四份标本的测定值在0.2—0.25ng/ml之间。由统计学分析x2=4>3.84(a=0.05)，所以P<0.05，统计学有显著差异，TR—FIA法优于RIA法。
3.2HBsAg按临界值质控血清≥0.2ng/ml时为阳性，作用时间为90秒的情况下其测定结果。
在作用时间为90秒的情况下，两种方法的检测结果完全一致，测定结果均为阴性，经统计学分析没有显著性差异。
RIA法检测氧化电位水对HBsAg抗原性的破坏能力存在假阴性的情况，而TR—FIA法检测结果的精度要高。为了保证消毒效果，建议在时间允许的情况下，延长消毒时间。
4.讨论
TR—FIA法，灵敏度可达10-13-10-18mol／L，高于RIA法[2-3]，本文检测HBsAg可达0.2ng／ml证明了这一点。时间分辨荧光免疫分析系统由于采用波长分辨、时间分辨和1000次均值等方法，提高了系统的探测灵敏度和探测特异性，真正实现了零本底测量[4]，大大减少了系统的随机误差，有效地提高了系统精度。所以对于TR—FIA法可以检测出来的阳性标本RIA法可能会检测不到。分析原因可能是TR—FIA法的加样精度、计数系统的测量精度和系统精度等方面都远远优于RIA法[5]；而且经过本实验的实践表明，TR—FIA法的测定结果也是完全可信的。
参考文献
[1]高哲平等.氧化电位水对HBsAg破坏效果的试验及临康观察.中华流行病举杂志.2001.22：40.
[2]田振，郭周义，贾雅丽.时间分辨免疫荧光分析及其在临床的应用.激光生物学报，2002，11(4)：290.
[3]秦卫仕，田蓉.时间分辨荧光免疫分析方法学评价.免疫学杂志.
[4]Eg&GWallac.AutoDelfiaMaintenanceManualforAu—toDelfiaWorkstationSoftwareVersionl.4[Z].Finland.1999，29—31.
[5]秦卫仕等.时间分辨荧光免疫分析和放射免疫分析测.量精度的比较.同位素，2002，15(2)：115—117.